| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 甜菊糖的概述 | 第12-19页 |
| 1.1.1 甜菊糖的简介 | 第12页 |
| 1.1.2 甜菊糖苷的组成、结构及性质 | 第12-15页 |
| 1.1.3 甜菊糖的安全性 | 第15页 |
| 1.1.4 甜菊糖的特性及应用 | 第15-16页 |
| 1.1.5 甜菊糖的发展趋势 | 第16-17页 |
| 1.1.6 甜菊糖苷的生物合成途径 | 第17-18页 |
| 1.1.7 UGT76G1 在酿酒酵母的表达 | 第18-19页 |
| 1.2 毕赤酵母细胞表面展示系统 | 第19-23页 |
| 1.2.1 毕赤酵母作为展示系统宿主细胞的优点 | 第20-21页 |
| 1.2.2 用于毕赤酵母表面展示的锚定蛋白 | 第21-22页 |
| 1.2.3 酵母 GPI 型细胞壁蛋白 | 第22-23页 |
| 1.3 提高基因剂量实现外源蛋白在毕赤酵母表达的高效表达 | 第23-25页 |
| 1.4 本课题研究的意义和内容 | 第25-27页 |
| 第二章 甜叶菊 UGT76G1 在毕赤酵母的表面展示 | 第27-53页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与设备 | 第27-32页 |
| 2.2.1 主要仪器和设备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.2.3 分子克隆工具酶及试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.4 化学试剂 | 第29页 |
| 2.2.5 溶液的配制 | 第29-30页 |
| 2.2.6 培养基的配制 | 第30-32页 |
| 2.3 实验流程 | 第32页 |
| 2.4 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.4.1 菌体的培养 | 第32页 |
| 2.4.2 菌种的保存 | 第32-33页 |
| 2.4.3 表面展示甜叶菊 UGT76G1（KAS1）毕赤酵母重组质粒的构建 | 第33-39页 |
| 2.4.4 毕赤酵母感受态的制备及转化 | 第39-40页 |
| 2.4.5 重组毕赤酵母转化子筛选及甜叶菊 UGT76G1 的诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.4.6 重组毕赤酵母细胞表面免疫荧光标记处理 | 第41-42页 |
| 2.4.7 展示甜叶菊 UTG76G1 酶活力的测定 | 第42-43页 |
| 2.4.8 展示甜叶菊 UTG76G1 酶学性质 | 第43-44页 |
| 2.5 实验结果与讨论 | 第44-51页 |
| 2.5.1 甜叶菊 UGT76G1 展示型重组质粒 pGCW61-KAS1 的构建 | 第44-46页 |
| 2.5.2 表面展示甜叶菊 UGT76G1 毕赤酵母重组子的构建与筛选 | 第46-48页 |
| 2.5.3 重组菌 GS115/ pGCW61-KAS1 的甲醇诱导产酶分析 | 第48-49页 |
| 2.5.4 毕赤酵母表面展示的甜叶菊 UGT76G1 的酶活性质 | 第49-51页 |
| 2.6 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 多拷贝提高 UGT76G1 在毕赤酵母表面的展示酶活 | 第53-78页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 实验设备与材料 | 第53-55页 |
| 3.2.1 主要仪器和设备 | 第53页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第53-54页 |
| 3.2.3 分子克隆工具酶及试剂 | 第54页 |
| 3.2.4 化学试剂 | 第54页 |
| 3.2.5 溶液的配制 | 第54-55页 |
| 3.2.6 培养基的配制 | 第55页 |
| 3.3 实验流程 | 第55-56页 |
| 3.4 实验方法 | 第56-65页 |
| 3.4.1 菌体的培养 | 第56页 |
| 3.4.2 菌种的保存 | 第56页 |
| 3.4.3 重组质粒 pHKA-K61 的构建 | 第56-58页 |
| 3.4.4 UGT76G1 多拷贝展示型重组质粒的构建 | 第58-60页 |
| 3.4.5 毕赤酵母感受态的制备及转化 | 第60页 |
| 3.4.6 重组毕赤酵母拷贝数的鉴定 | 第60-65页 |
| 3.4.7 重组毕赤酵母转化子筛选及甜叶菊 UGT76G1 的诱导表达 | 第65页 |
| 3.4.8 毕赤酵母细胞免疫荧光标记处理 | 第65页 |
| 3.4.9 展示甜叶菊 UTG76G1 酶活力的测定 | 第65页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第65-76页 |
| 3.5.1 单拷贝重组质粒 pHKA-K61 的构建 | 第65-67页 |
| 3.5.2 多拷贝重组质粒的构建 | 第67-70页 |
| 3.5.3 毕赤酵母多拷贝重组子筛选与鉴定 | 第70-71页 |
| 3.5.4 重组毕赤酵母拷贝数的测定 | 第71-74页 |
| 3.5.5 多拷贝重组毕赤酵母的甲醇诱导产酶分析 | 第74-76页 |
| 3.6 本章小结 | 第76-78页 |
| 结论与展望 | 第78-81页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 附件 | 第91页 |
