| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第7-18页 |
| 1.单增李斯特菌的概述 | 第7-11页 |
| 1.1 单增李斯特菌的生物学特征及血清型分类 | 第7-8页 |
| 1.2 单增李斯特菌的致病机理 | 第8-10页 |
| 1.3 MurA 蛋白 | 第10页 |
| 1.3.1 MurA 蛋白 | 第10页 |
| 1.3.2 MurA 蛋白的结构和功能 | 第10页 |
| 1.4 单增李斯特菌的污染现状及危害 | 第10-11页 |
| 2.单增李斯特菌检测方法的研究 | 第11-13页 |
| 2.1 传统检测方法 | 第11页 |
| 2.2 免疫学检测技术 | 第11-12页 |
| 2.3 分子生物学检测方法 | 第12-13页 |
| 3.免疫磁珠分离技术 | 第13-16页 |
| 3.1 免疫磁珠的结构 | 第13-14页 |
| 3.2 免疫磁珠富集原理 | 第14页 |
| 3.3 免疫磁珠富集优势 | 第14-16页 |
| 3.3.1 操作简便、省时 | 第14-15页 |
| 3.3.2 对目标物的生物活性的保护作用 | 第15页 |
| 3.3.3 特异性富集 | 第15页 |
| 3.3.4 有利于提高检测限 | 第15-16页 |
| 3.4 免疫磁珠富集技术在病原微生物检测中的应用 | 第16页 |
| 4.本研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 5.技术路线图 | 第17-18页 |
| 第二章 单增李斯特菌 MurA 蛋白的表达、纯化及鼠多克隆抗体的制备 | 第18-28页 |
| 1 材料与方法 | 第18-20页 |
| 1.1 主要仪器和试剂 | 第18-19页 |
| 1.2 主要溶液的配制方法 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.1 原核表达单增李斯特菌 MurA 蛋白 | 第20-21页 |
| 2.1.1 MurA 基因的扩增 | 第20页 |
| 2.1.2 pET28a(+)-MurA 表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.1.3 重组 MurA 蛋白的诱导表达及表达产物的可溶性分析 | 第21页 |
| 2.1.4 重组 MurA 蛋白的分离纯化及质谱鉴定 | 第21页 |
| 2.2 鼠抗 MurA 多克隆抗体的的制备 | 第21-22页 |
| 2.3 鼠多克隆抗体的效价及交叉性分析 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-27页 |
| 3.1 MurA 基因的克隆及表达 | 第22-23页 |
| 3.1.1 MurA 基因的 PCR 扩增 | 第22-23页 |
| 3.1.2 pET28a(+)-MurA 重组质粒的酶切鉴定 | 第23页 |
| 3.2 MurA 蛋白的镍柱纯化与鉴定 | 第23-25页 |
| 3.2.1 IPTG 诱导 MurA 重组蛋白表达及其可溶性分析 | 第23-24页 |
| 3.2.2 镍柱纯化重组 MurA 蛋白 | 第24-25页 |
| 3.3 鼠多抗的效价测定及其交叉性分析 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27页 |
| 5 结论 | 第27-28页 |
| 第三章 单增李斯特菌免疫磁珠-显色培养基法研究 | 第28-36页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1 主要试剂盒仪器设备 | 第28页 |
| 1.2 实验所用菌株 | 第28页 |
| 1.3 实验小鼠 | 第28-29页 |
| 1.4 实验用试剂的配置方法 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.1 菌株的培养及灭活 | 第30页 |
| 2.2 免疫磁珠的制备 | 第30页 |
| 2.2.1 甲苯磺酰基活化的免疫磁珠制备 | 第30页 |
| 2.3 免疫磁珠-选择性培养基法检测单增李斯特菌 | 第30-31页 |
| 2.3.1 免疫磁珠-选择性培养基法的特异性 | 第30-31页 |
| 2.3.2 免疫磁珠-选择性培养基法的检测灵敏度 | 第31页 |
| 2.4 免疫磁珠-选择性培养基法检测牛奶样品 | 第31-32页 |
| 2.4.1 免疫磁珠-选择性培养基法检测不同污染程度牛奶样品 | 第31页 |
| 2.4.2 免疫磁珠-显色培养基法检测低浓度菌污染的牛奶样品 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-34页 |
| 3.1 免疫磁珠-选择性培养基法的特异性分析 | 第32页 |
| 3.2 免疫磁珠-选择性培养基法灵敏度分析 | 第32-33页 |
| 3.3 免疫磁珠-选择性培养基法检测不同浓度人工污染牛奶样品 | 第33-34页 |
| 3.4 免疫磁珠-显色培养基法检测不同增菌时间下的人工污染牛奶样品 | 第34页 |
| 4. 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 结论与展望 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 在校期间发表论文和学术交流情况 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
