| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-17页 |
| 1 植物黄酮 | 第12页 |
| 2 植物黄酮的生物合成及调控 | 第12-14页 |
| 3 植物MYB转录因子研究进展 | 第14-15页 |
| 3.1 MYB转录因子的结构特征与功能 | 第14页 |
| 3.2 MYB转录因子对植物黄酮代谢的调控 | 第14-15页 |
| 4 苦荞黄酮类化合物的研究进展 | 第15-16页 |
| 5 立题目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 苦荞转录因子FtMYB5基因的克隆及分子鉴定 | 第17-31页 |
| 1 材料与方法 | 第17-22页 |
| 1.1 材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第17页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 1.1.4 酵母单杂交所用培养基和溶液 | 第17-18页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第18页 |
| 1.2 方法 | 第18-22页 |
| 1.2.1 苦荞FtMYB5基因cDNA序列的克隆 | 第18-19页 |
| 1.2.2 苦荞FtMYB5基因DNA序列的克隆 | 第19页 |
| 1.2.3 苦荞FtMYB5基因的生物信息学分析 | 第19页 |
| 1.2.4 酵母单杂交重组载体的构建 | 第19-20页 |
| 1.2.5 重组质粒pBridge-FtMYB5酵母转化 | 第20页 |
| 1.2.6 β-半乳糖苷酶活性的滤纸分析 | 第20页 |
| 1.2.7 FtMYB5亚细胞定位载体构建 | 第20-21页 |
| 1.2.8 FtMYB5亚细胞定位质粒提取 | 第21页 |
| 1.2.9 拟南芥原生质体制备及质粒转化 | 第21-22页 |
| 2. 结果与分析 | 第22-29页 |
| 2.1 苦荞FtMYB5 cDNA序列的扩增 | 第22页 |
| 2.2 苦荞FtMYB5 DNA序列的扩增 | 第22-23页 |
| 2.3 苦荞FtMYB5生物信息学分析 | 第23-26页 |
| 2.3.1 氨基酸序列分析及多序列比对 | 第23-24页 |
| 2.3.2 进化树分析 | 第24-26页 |
| 2.4 FtMYB5酵母单杂交重组质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.5 重组质粒的酵母转化 | 第27页 |
| 2.6 阳性菌株β-半乳糖苷酶活性的滤纸分析 | 第27-28页 |
| 2.7 FtMYB5亚细胞定位载体构建 | 第28页 |
| 2.8 FtMYB5亚细胞定位分析 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 苦荞FtMYB5基因表达量与黄酮含量分析 | 第31-39页 |
| 1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 1.1.2 主要试剂和药品 | 第31页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 苦荞花期组织材料获得 | 第31页 |
| 1.2.2 芽期苦荞光照及黑暗处理 | 第31-32页 |
| 1.2.3 苦荞样品总RNA提取及cDNA制备 | 第32页 |
| 1.2.4 荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 1.2.5 苦荞总黄酮提取及测定 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.1 苦荞花期各组织黄酮含量分析 | 第33-34页 |
| 2.2 花期苦荞黄酮合成相关基因表达量分析 | 第34-35页 |
| 2.3 光照及黑暗条件下芽期苦荞黄酮含量分析 | 第35-36页 |
| 2.4 光照对芽期苦荞黄酮合成相关基因表达量的影响 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)的克隆及功能鉴定 | 第39-53页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第39页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 1.1.4 培养基 | 第39-40页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-44页 |
| 1.2.1 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)的克隆 | 第40-41页 |
| 1.2.2 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)序列分析 | 第41页 |
| 1.2.3 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 1.2.4 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)表达载体的转化 | 第42页 |
| 1.2.5 拟南芥转化 | 第42-43页 |
| 1.2.6 转基因拟南芥种植 | 第43-44页 |
| 1.2.7 拟南芥幼苗光照及黑暗处理 | 第44页 |
| 1.2.8 拟南芥GUS染色 | 第44页 |
| 1.2.9 拟南芥光照及黑暗处理条件下GUS基因表达量检测 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-51页 |
| 2.1 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)的克隆 | 第44-45页 |
| 2.2 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 2.3 苦荞FtMYB5启动子P_(FtMYB5)表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.4 阳性拟南芥的筛选和鉴定 | 第48-49页 |
| 2.5 转基因拟南芥染色 | 第49页 |
| 2.6 转基因拟南芥光照及黑暗处理 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 苦荞转录因子FtMYB5的转基因功能鉴定 | 第53-65页 |
| 1 材料与方法 | 第53-58页 |
| 1.1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第53页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第53页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第53页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第53页 |
| 1.1.5 培养基 | 第53-54页 |
| 1.2 方法 | 第54-58页 |
| 1.2.1 FtMYB5植物表达载体的构建 | 第54页 |
| 1.2.2 FtMYB5植物表达载体转化农杆菌 | 第54-55页 |
| 1.2.3 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第55-56页 |
| 1.2.4 转基因烟草的阳性鉴定 | 第56页 |
| 1.2.5 阳性转基因烟草的表型观察 | 第56页 |
| 1.2.6 阳性转基因烟草中黄酮合成途径结构基因的表达量分析 | 第56页 |
| 1.2.7 转基因烟草中总黄酮及花青素含量分析 | 第56-57页 |
| 1.2.8 转基因烟草中黄酮醇含量分析 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-63页 |
| 2.1 FtMYB5植物表达载体的构建 | 第58页 |
| 2.2 转基因烟草的筛选和鉴定 | 第58-60页 |
| 2.3 转基因烟草表型 | 第60页 |
| 2.4 转基因烟草中黄酮和花青素含量分析 | 第60-61页 |
| 2.5 转基因烟草中黄酮合成支路关键酶基因表达量分析 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 硕士期间发表论文 | 第70页 |
