| 符号及缩略词说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 引言 | 第14-31页 |
| 1.1 禽白血病概述 | 第14页 |
| 1.2 禽白血病病毒概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 病毒形态学特征 | 第14-15页 |
| 1.2.2 核酸和基因组结构及其生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.2.2.1 核酸和基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 复制型和复制缺陷型禽白血病病毒的基因结构特点 | 第16页 |
| 1.2.3 病毒基因组的复制过程及前病毒 DNA | 第16-17页 |
| 1.2.4 病毒的抗原特性 | 第17页 |
| 1.3 我国地方鸡群禽白血病流行病学概述 | 第17-20页 |
| 1.3.1 地方鸡禽白血病病毒感染的普遍性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 我国鸡群 A/B 亚群禽白血病的感染状况 | 第18-19页 |
| 1.3.3 寿光鸡禽白血病现状 | 第19-20页 |
| 1.3.3.1 寿光鸡简介 | 第19页 |
| 1.3.3.2 寿光鸡鸡群 ALV 感染的现状 | 第19-20页 |
| 1.4 禽白血病的检测和诊断 | 第20-25页 |
| 1.4.1 病原学检测技术在禽白血病诊断上的应用及其研发 | 第20-23页 |
| 1.4.1.1 病毒分离、鉴定和检测 | 第20-22页 |
| 1.4.1.2 核酸技术检测致病性外源 ALV | 第22-23页 |
| 1.4.2 血清学检测 | 第23-25页 |
| 1.4.2.1 ALV 血清抗体检测的方法 | 第24-25页 |
| 1.4.2.2 对 ALV 抗体检测的意义 | 第25页 |
| 1.5 禽白血病的预防和控制 | 第25-28页 |
| 1.5.1 选择净化的种源及净化原种群 | 第25-26页 |
| 1.5.2 原种鸡场的核心群外源白血病病毒的净化 | 第26-27页 |
| 1.5.3 严格预防使用被外源性 ALV 污染的弱毒疫苗 | 第27页 |
| 1.5.4 鸡舍的环境控制 | 第27-28页 |
| 1.5.5 抗病毒药物的预防控制作用 | 第28页 |
| 1.6 单克隆抗体技术的原理与单克隆抗体在畜禽业的应用 | 第28-29页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-58页 |
| 2.1 材料 | 第31-35页 |
| 2.1.1 蛋白制备材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1.1 病毒来源 | 第31页 |
| 2.1.1.2 菌株与载体 | 第31页 |
| 2.1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第31-32页 |
| 2.1.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.1.5 主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| 2.1.2 单克隆抗体制备材料 | 第33-35页 |
| 2.1.2.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.1.2.2 细胞系及病毒毒株 | 第33页 |
| 2.1.2.3 主要试剂及耗材 | 第33-34页 |
| 2.1.2.4 主要仪器 | 第34页 |
| 2.1.2.5 主要试剂的配制： | 第34-35页 |
| 2.2 方法 | 第35-58页 |
| 2.2.1 寿光鸡禽白血病流行病学检测 | 第35-39页 |
| 2.2.1.1 泄殖腔棉拭子 p27 抗原的检测 | 第36-37页 |
| 2.2.1.2 ALV-A/B 抗体的检测 | 第37-38页 |
| 2.2.1.3 ALV-J 抗体的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.2 病鸡剖检病变的观察 | 第39页 |
| 2.2.3 寿光鸡病理组织切片的制备及观察 | 第39页 |
| 2.2.4 蛋白制备方法 | 第39-50页 |
| 2.2.4.1 病料组织的获取 | 第39页 |
| 2.2.4.2 前病毒 DNA 的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4.3 ALV-B-SG12-gp85 基因 PCR 引物的设计与合成 | 第40页 |
| 2.2.4.4 PCR | 第40页 |
| 2.2.4.5 目的条带的回收 | 第40-41页 |
| 2.2.4.6 PCR 回收产物的连接反应 | 第41-42页 |
| 2.2.4.7 连接产物的转化 | 第42页 |
| 2.2.4.8 阳性克隆细菌的筛选 | 第42页 |
| 2.2.4.9 质粒 DNA 的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.4.10 序列测定与分析 | 第43-44页 |
| 2.2.4.11 pET-ALV-B-SG12-gp85 重组质粒的构建和鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.4.12 连接产物的转化至表达菌株 BL21 感受态细胞 | 第45页 |
| 2.2.4.13 重组质粒 pET-ALV-B-SG12-gp85 的双酶切鉴定 | 第45页 |
| 2.2.4.14 目的蛋白诱导表达条件的筛选及优化 | 第45页 |
| 2.2.4.15 重组蛋白 env-gp85 的大量表达 | 第45-46页 |
| 2.2.4.16 菌体的超声波裂解及纯化 | 第46页 |
| 2.2.4.17 重组蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| 2.2.4.18 透析袋的处理 | 第48页 |
| 2.2.4.19 蛋白的透析复性 | 第48页 |
| 2.2.4.20 重组菌菌体裂解物以及纯化后蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第48-50页 |
| 2.2.5 单克隆抗体制备方法 | 第50-58页 |
| 2.2.5.1 间接 ELISA 方法的建立： | 第50-52页 |
| 2.2.5.2 免疫原制剂的制备 | 第52页 |
| 2.2.5.3 细胞融合 | 第52-55页 |
| 2.2.5.4 细胞培养和观察以及检测和初步筛选 | 第55页 |
| 2.2.5.5 杂交瘤细胞的亚克隆化 | 第55-56页 |
| 2.2.5.6 杂交瘤细胞的冻存 | 第56页 |
| 2.2.5.7 冻存杂交瘤细胞的复苏 | 第56-57页 |
| 2.2.5.8 单克隆抗体的 IFA 检测 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-67页 |
| 3.1 寿光鸡禽白血病流行病学检测结果 | 第58页 |
| 3.2 病鸡剖检病变 | 第58-59页 |
| 3.3 病鸡组织病理切片观察 | 第59页 |
| 3.4 蛋白制备结果与分析 | 第59-63页 |
| 3.4.1 ALV-B-SG12 株 gp85 基因的 PCR 扩增结果 | 第59-60页 |
| 3.4.2 ALV-B-SG12-gp85 的序列与遗传进化分析 | 第60-62页 |
| 3.4.3 重组质粒 pET32a-ALV-B-SG12-gp85 的筛选和鉴定 | 第62页 |
| 3.4.4 pET-ALV-B-SG12-gp85转化菌株的菌液裂解蛋白以及纯化后蛋白的SDS-PAGE检测 | 第62-63页 |
| 3.5 单克隆抗体制备结果与分析 | 第63-67页 |
| 3.5.1 间接 ELISA 检测方法的建立 | 第63-64页 |
| 3.5.1.1 最佳反应条件的确定 | 第63-64页 |
| 3.5.1.2 重复性和特异性试验 | 第64页 |
| 3.5.2 细胞融合效果和阳性杂交瘤细胞的筛选和冻存 | 第64-65页 |
| 3.5.3 亚克隆结果 | 第65页 |
| 3.5.4 单抗 IFA 检测结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 创新点 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 硕士期间发表或录用的论文 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
