| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 稻瘟病与稻瘟菌 | 第13-18页 |
| 1.1.1 稻瘟病 | 第13-14页 |
| 1.1.2 稻瘟菌的生活史与侵染循环 | 第14-15页 |
| 1.1.3 稻瘟病的防治 | 第15-16页 |
| 1.1.4 稻瘟菌致病相关基因的研究 | 第16-17页 |
| 1.1.5 稻瘟菌无毒基因的研究 | 第17-18页 |
| 1.2 RNA 剪接与剪接蛋白 U1A | 第18-24页 |
| 1.2.1 RNA 剪接与选择性剪接 | 第18-19页 |
| 1.2.2 研究选择性剪接的意义 | 第19-20页 |
| 1.2.3 RNA 剪接过程 | 第20-22页 |
| 1.2.4 U1 snRNP 与 U1A | 第22-24页 |
| 1.3 丝状真菌基因功能研究方法 | 第24-28页 |
| 1.3.1 基因敲除 | 第24-25页 |
| 1.3.2 RNA 干扰 | 第25-27页 |
| 1.3.3 基因超表达 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 第二章 材料和方法 | 第29-59页 |
| 2.1 材料 | 第29-37页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第29页 |
| 2.1.2 供试载体 | 第29页 |
| 2.1.3 供试培养基 | 第29-33页 |
| 2.1.3.1 细菌用培养基 | 第29-30页 |
| 2.1.3.2 稻瘟菌用培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.3.3 农杆菌介导的稻瘟菌遗传转化所需培养基 | 第31-33页 |
| 2.1.3.4 稻瘟菌原生质体再生培养基 | 第33页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.6 供试引物 | 第35-37页 |
| 2.2 方法 | 第37-59页 |
| 2.2.1 基因序列的获得 | 第37页 |
| 2.2.2 分子生物学相关实验 | 第37-44页 |
| 2.2.2.1 稻瘟菌基因组 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 稻瘟菌总 RNA 的提取与 cDNA 的获得 | 第38-40页 |
| 2.2.2.3 PCR 反应 | 第40-42页 |
| 2.2.2.4 PCR 产物纯化 | 第42页 |
| 2.2.2.5 连接反应 | 第42-43页 |
| 2.2.2.6 质粒 DNA 的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.2.7 酶切反应 | 第44页 |
| 2.2.3 细菌感受态细胞的制备与转化 | 第44-47页 |
| 2.2.3.1 大肠杆菌 DH5α热激感受态的制备与转化 | 第44-46页 |
| 2.2.3.2 农杆菌 AGL-1 热激感受态的制备与转化 | 第46-47页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的稻瘟菌遗传转化（以敲除为例） | 第47-49页 |
| 2.2.4.1 农杆菌 AGL-1 的活化 | 第47页 |
| 2.2.4.2 野生型稻瘟菌 70-15 的活化及产孢 | 第47页 |
| 2.2.4.3 农杆菌与稻瘟菌孢子的共培养 | 第47-48页 |
| 2.2.4.4 筛选培养及转化子的获得 | 第48页 |
| 2.2.4.5 转化子的单孢纯化 | 第48-49页 |
| 2.2.5 稻瘟菌原生质体的制备及转化 | 第49-50页 |
| 2.2.5.1 稻瘟菌原生质体的制备 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2 稻瘟菌原生质体的转化 | 第50页 |
| 2.2.6 MU1A 敲除载体的构建 | 第50-53页 |
| 2.2.7 MU1A 沉默载体的构建 | 第53-55页 |
| 2.2.8 MU1A 过量表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 2.2.9 MU1A 突变体相关生物学性状分析 | 第56-59页 |
| 2.2.9.1 MU1A 突变体的孢子观察 | 第56-57页 |
| 2.2.9.2 MU1A 突变体的附着胞观察 | 第57页 |
| 2.2.9.3 MU1A 突变体侵染洋葱表皮试验 | 第57页 |
| 2.2.9.4 MU1A 突变体对过氧化氢敏感性试验 | 第57-58页 |
| 2.2.9.5 MU1A 突变体的刚果红胁迫试验 | 第58页 |
| 2.2.9.6 MU1A 突变体的 SDS 胁迫试验 | 第58-59页 |
| 第三章 结果与分析 | 第59-81页 |
| 3.1 MU1A 基因的生物信息学分析 | 第59-60页 |
| 3.2 MU1A 基因的敲除与特殊转化子的分析 | 第60-68页 |
| 3.2.1 农杆菌介导的稻瘟菌遗传转化结果与分析 | 第61-64页 |
| 3.2.1.1 MU1A 基因敲除载体的 PCR 与酶切验证 | 第61-62页 |
| 3.2.1.2 转化子的 PCR 验证 | 第62-63页 |
| 3.2.1.3 转化子 88Q1 的 Tail-PCR 分析 | 第63-64页 |
| 3.2.2 PEG 介导的稻瘟菌原生质体转化结果与分析 | 第64-68页 |
| 3.2.2.1 Up DNA+Hyg+Down DNA 线性敲除片段的获得 | 第65页 |
| 3.2.2.2 野生型稻瘟菌 70-15 原生质体的获得 | 第65-66页 |
| 3.2.2.3 转化子的 PCR 验证 | 第66-67页 |
| 3.2.2.4 21 号转化子的 qRT-PCR 分析 | 第67-68页 |
| 3.3 MU1A 基因的沉默 | 第68-71页 |
| 3.3.1 MU1A 基因沉默载体的 PCR 与酶切验证 | 第68-69页 |
| 3.3.2 MU1A 基因沉默转化子的 PCR、q-RT PCR 检测 | 第69-71页 |
| 3.4 MU1A 基因的过量表达 | 第71-73页 |
| 3.4.1 MU1A 基因过表达载体的 PCR 与酶切验证 | 第71-72页 |
| 3.4.2 MU1A 基因过表达转化子的 PCR 验证 | 第72-73页 |
| 3.5 MU1A 突变体相关生物学性状 | 第73-81页 |
| 3.5.1 MU1A 突变体的菌落生长形态观察 | 第73页 |
| 3.5.2 MU1A 突变体的孢子形态观察 | 第73-75页 |
| 3.5.3 MU1A 突变体的附着胞形成观察 | 第75-76页 |
| 3.5.4 MU1A 突变体侵染性菌丝观察 | 第76-77页 |
| 3.5.5 MU1A 突变体对过氧化氢的敏感性 | 第77-79页 |
| 3.5.6 MU1A 基因敲除突变体对刚果红胁迫的敏感性 | 第79-80页 |
| 3.5.7 MU1A 基因敲除突变体对 SDS 胁迫的敏感性 | 第80-81页 |
| 结论与讨论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 作者简介 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
