| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 聚羟基脂肪酸(PHA)的简介 | 第11-16页 |
| 1.1.1 PHA的组成和分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 PHA的性质及应用前景 | 第12-13页 |
| 1.1.3 PHA的生物合成 | 第13-15页 |
| 1.1.3.1 短链PHA的三步合成法 | 第14页 |
| 1.1.3.2 脂肪酸β-氧化途径 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 脂肪酸从头合成途径 | 第15页 |
| 1.1.3.4 其他合成途径 | 第15页 |
| 1.1.4 PHA的提纯和检测 | 第15-16页 |
| 1.2 外源大片段的基因组整合 | 第16-18页 |
| 1.2.1 Red同源重组 | 第16页 |
| 1.2.2 染色体的定向进化 | 第16-17页 |
| 1.2.3 噬菌体整合技术 | 第17页 |
| 1.2.4 大片段整合技术 | 第17页 |
| 1.2.5 Flp/FRT位点专一性重组 | 第17-18页 |
| 1.3 微生物群体感应系统 | 第18-21页 |
| 1.3.1 革兰氏阴性菌中的生物感应 | 第18-19页 |
| 1.3.2 革兰氏阳性菌中的群体感应 | 第19-21页 |
| 第二章 生产嵌段共聚物的基础菌株的构建 | 第21-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.2 PCR和敲除引物 | 第24-25页 |
| 2.1.3. 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验室常用药品与试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.4.1 常用药品及分子量标准物 | 第26-27页 |
| 2.1.4.2 抗生素溶液的配制 | 第27页 |
| 2.1.4.3 其他溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验设备和仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.2.1 分子生物学常规操作 | 第29-34页 |
| 2.2.1.1 菌种的保藏 | 第29页 |
| 2.2.1.2 质粒的提取 | 第29页 |
| 2.2.1.3 PCR及产物纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的纯化回收 | 第30页 |
| 2.2.1.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.1.6 大肠杆菌的热激转化 | 第31页 |
| 2.2.1.7 电转化感受态制备及基因敲除 | 第31-32页 |
| 2.2.1.8 质粒的Gibson体外组装法 | 第32页 |
| 2.2.1.9 细菌总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.1 10 RT-PCR | 第33页 |
| 2.2.1.11 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 2.2.2 QW102苏氨酸代谢途径的改造 | 第34-35页 |
| 2.2.2.1 QW102菌株基因组上thrA基因的敲除 | 第34页 |
| 2.2.2.2 pTKIP-thrA整合质粒的构建 | 第34页 |
| 2.2.2.3 点突变的thrA~*的基因组整合 | 第34-35页 |
| 2.2.3 利用FRT位点整合PHBV合成途径 | 第35-36页 |
| 2.2.3.1 FRT位点整合方法的验证 | 第35-36页 |
| 2.2.3.2 PHBV合成途径的基因组整合 | 第36页 |
| 2.2.4 ilvA_(CG)表达载体的构建 | 第36页 |
| 2.2.5 ilvA_(CG)表达对基础菌株产物的影响 | 第36-37页 |
| 2.2.6 PHB和PHBV的发酵方法 | 第37页 |
| 2.2.6.1 种子培养 | 第37页 |
| 2.2.6.2 分批发酵培养 | 第37页 |
| 2.2.7 PHB和PHBV的提取检测方法 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 QW102苏氨酸代谢途径的改造 | 第38-43页 |
| 2.4.1.1 QW102菌株thrA基因的敲除 | 第38-39页 |
| 2.4.1.2 pTKIP-thrA整合质粒的构建 | 第39-40页 |
| 2.4.1.3 点突变的thrA~*的基因组整合 | 第40-41页 |
| 2.4.1.4 pTKRED质粒及Kan抗性的去除 | 第41-42页 |
| 2.4.1.5 XL102菌株thrA转录水平及苏氨酸产量检测 | 第42-43页 |
| 2.4.2 PHBV合成操纵子的基因组整合 | 第43-50页 |
| 2.4.2.1 通过PHB整合验证FRT位点整合效率 | 第43-47页 |
| 2.4.2.2 整合质粒pQXL的构建及phaCBB操纵子的基因组整合 | 第47-48页 |
| 2.4.2.3 ilvA_(CG)表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.4.2.4 ilvA_(CG)基因表达对基础菌株XL103产物的影响 | 第49-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 利用基因回路生产PHB-co-PHBV嵌段共聚物的初步探索 | 第51-73页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-55页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第52-53页 |
| 3.1.2 引物及序列 | 第53-55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 3.2.1 实验总体思路 | 第55页 |
| 3.2.2 质粒的构建和表达 | 第55-57页 |
| 3.2.2.1 pQS3和pQS4质粒的构建 | 第56页 |
| 3.2.2.2 96孔板培养pQS3和pQS4双转化菌株 | 第56-57页 |
| 3.2.2.3 质粒pQS51和pQS52的构建 | 第57页 |
| 3.2.2.4 质粒pQS6的构建 | 第57页 |
| 3.2.2.5 质粒pQS6A、pQS6B、pQS6C、pQS6D的构建 | 第57页 |
| 3.2.3 荧光的检测 | 第57-58页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第58-71页 |
| 3.3.1 基因回路的构建---pQS3和pQS4质粒 | 第58-59页 |
| 3.3.2 基因回路的表达检测 | 第59-64页 |
| 3.3.3 基因回路改进——组成型启动子启动基因回路 | 第64-66页 |
| 3.3.4 基因回路改进——luxR的组成型表达 | 第66-68页 |
| 3.3.5 基因回路改进——降低luxI蛋白降解效率 | 第68-70页 |
| 3.3.6 基因回路改进——摇瓶培养 | 第70-71页 |
| 3.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 全文总结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第85-86页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第86页 |
