| 英文縮略表 | 第5-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 前言 | 第15页 |
| 1 TGEV的病原特征 | 第15-20页 |
| 1.1 形态学特征 | 第15-16页 |
| 1.2 病毒的抗原性 | 第16页 |
| 1.3 病毒的理化特性 | 第16-17页 |
| 1.4 TGE流行病学 | 第17-18页 |
| 1.5 TGEV致病机制 | 第18页 |
| 1.6 病原分子生物学 | 第18-20页 |
| 2 以减毒沙门氏菌作为核酸疫苗活载体的研究 | 第20-22页 |
| 2.1 减毒沙门氏菌入侵机体免疫系统的可能机制 | 第20-21页 |
| 2.2 减毒沙门氏菌的作为DNA疫苗载体的优势与应用 | 第21-22页 |
| 3. 内部核糖体进入位点(IRES)序列 | 第22-23页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 试验部分 | 第24-71页 |
| 1 材料与试剂仪器 | 第24-26页 |
| 1.1 生物材料 | 第24页 |
| 1.2 试剂 | 第24-25页 |
| 1.3 试剂配制 | 第25-26页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2. 方法 | 第26-45页 |
| 2.1 M基因重组质粒pVAX-M、pIRES-M、pVAX-S-M的构建 | 第26-39页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.1.2 TGEV M基因的获取 | 第27-28页 |
| 2.1.3 M基因T-A克隆载体的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.1.4 M基因克隆重组质粒的鉴定 | 第30-32页 |
| 2.1.5 M基因真核表达质粒pVAX-M的构建 | 第32-33页 |
| 2.1.6 S、M双基因真核表达质粒pVAX-S-M的构建 | 第33-37页 |
| 2.1.6.1 技术路线图 | 第33-34页 |
| 2.1.6.2 中间表达质粒pIRES-M的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.6.3 S、M双基因表达质粒pVAX-S-M的构建 | 第35-37页 |
| 2.1.7 重组质粒pVAX-S、pVAX-M、pVAX-S-M的体外表达 | 第37-39页 |
| 2.2 携带S、M双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建与鉴定 | 第39-43页 |
| 2.2.1 减毒沙门氏菌SL7207感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.2 重组质粒pVAX-S-M及pVAX-M的抽提 | 第40页 |
| 2.2.3 减毒沙门氏菌SL7207的电转化 | 第40-41页 |
| 2.2.4 重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第41页 |
| 2.2.5 体外重组减毒沙门氏菌中质粒的稳定性 | 第41页 |
| 2.2.6 小鼠体内感染重组减毒沙门氏菌后RT-PCR检测基因转录. | 第41-42页 |
| 2.2.7 重组减毒沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第42-43页 |
| 2.3 携带S、M双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的初步免疫评价 | 第43-45页 |
| 2.3.1 试验小鼠分组、免疫及样品采集 | 第43页 |
| 2.3.2 特异性TGEV血清IgG和肠道粘膜IgA抗体测定 | 第43-44页 |
| 2.3.3 免疫小鼠白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的测定 | 第44-45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-66页 |
| 3.1 M基因重组质粒pVAX-M、pIRES-M、pVAX-S-M的鉴定 | 第45-52页 |
| 3.1.1 M基因的RT-RCR结果 | 第45页 |
| 3.1.2 M基因重组质粒pMD19T-M的鉴定 | 第45-47页 |
| 3.1.2.1 菌落PCR及酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3.1.2.2 M基因序列测定与分析结果 | 第46-47页 |
| 3.1.3 M基因真核表达质粒pVAX-M的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.1.4 M基因中间表达质粒pIRES-M的鉴定 | 第49-51页 |
| 3.1.5 S、M双基因真核表达质粒pVAX-S-M的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.1.6 重组质粒pVAX-M、pVAX-S-M、pVAX-S转染后的RT-PCR检测 | 第52页 |
| 3.2 重组沙门氏菌菌株的鉴定 | 第52-58页 |
| 3.2.1 转入减毒沙门氏菌SL7207的质粒pVAX-M、pVAX-S-M的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.2.2 重组减毒沙门氏菌的体外稳定性试验 | 第54-55页 |
| 3.2.3 重组减毒沙门氏菌体内感染小鼠后RT-PCR检测基因的转录 | 第55-56页 |
| 3.2.4 重组减毒沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第56-58页 |
| 3.3 携带S、M双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的初步免疫结果 | 第58-66页 |
| 3.3.1 抗TGEV特异性血清IgG的检测 | 第58-59页 |
| 3.3.2 抗TGEV特异性肠道IgA检测 | 第59-61页 |
| 3.3.3 免疫小鼠白细胞介素4(IL-4)测定 | 第61-63页 |
| 3.3.4 免疫小鼠干扰素γ(IFN-γ)测定 | 第63-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 引入IRES序列的双顺反子表达载体的构建 | 第66页 |
| 4.2 重组质粒的体外表达 | 第66-67页 |
| 4.3 选择减毒沙门氏菌SL7207作为疫苗载体的原因 | 第67-68页 |
| 4.4 免疫小鼠后机体抗TGEV特异性IgA和IgG含量变化的探讨 | 第68-69页 |
| 4.5 免疫小鼠后机体细胞因子IL-4和IFN-γ含量变化的探讨 | 第69页 |
| 4.6 本试验需要完善的地方 | 第69-70页 |
| 5. 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
