| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 荧光素酶的催化发光原理与应用 | 第8-11页 |
| 1.1.1 荧光素酶的催化发光原理 | 第8-9页 |
| 1.1.2 荧光素酶的应用 | 第9-11页 |
| 1.2 荧光素酶的分子结构与基因工程研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 荧光素酶的分子结构 | 第11页 |
| 1.2.2 萤火虫荧光素酶的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.3 意大利萤火虫荧光素酶的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 荧光素酶催化半衰期的优化 | 第13-14页 |
| 1.4 稳定剂对酶蛋白的稳定作用 | 第14-15页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 重组荧光素酶高效表达载体的构建及诱导表达 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第17-18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 目的基因的全基因合成 | 第19页 |
| 2.2.2 重组表达载体的构建 | 第19-23页 |
| 2.3 意大利萤火虫荧光素酶的诱导表达及活性鉴定 | 第23-25页 |
| 2.3.1 基因工程菌生长曲线的测定 | 第23页 |
| 2.3.2 荧光素酶的诱导表达 | 第23页 |
| 2.3.3 表达产物的 SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第23-25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-33页 |
| 2.4.1 意大利萤火虫荧光素酶重组表达载体的构建 | 第25-29页 |
| 2.4.2 意大利萤火虫荧光素酶的诱导表达 | 第29-33页 |
| 第三章 重组意大利萤火虫荧光素酶稳定性研究 | 第33-45页 |
| 3.1 实验仪器和材料 | 第33页 |
| 3.2 意大利荧光素酶催化发光的基本性质研究 | 第33-36页 |
| 3.2.1 ATP 标准曲线的制作 | 第33-34页 |
| 3.2.2 不同反应成分的浓度对发光强度的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.3 荧光素酶稳定性的研究 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 第四章 延长重组荧光素酶的半衰期和发光时间 | 第45-50页 |
| 4.1 重组荧光素酶的半衰期及延长半衰期的意义 | 第45页 |
| 4.2 延长半衰期的方法研究 | 第45-46页 |
| 4.2.1 缓冲液对半衰期的影响 | 第45页 |
| 4.2.2 中性盐溶液对半衰期的影响 | 第45页 |
| 4.2.3 PH 对半衰期的影响 | 第45-46页 |
| 4.2.4 氨基酸对半衰期的影响 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 4.3.1 各种缓冲液对半衰期的影响 | 第46页 |
| 4.3.2 离子强度对半衰期的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.3 PH 对半衰期的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.4 氨基酸对发光强度的影响 | 第48-50页 |
| 第五章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 5.1 结论 | 第50页 |
| 5.2 展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |