| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1 白介素15概述 | 第9-11页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·IL的发现 | 第9页 |
| ·IL-15结构与生物学功能 | 第9-11页 |
| ·IL-15对T细胞的作用 | 第10页 |
| ·IL-15对B细胞的作用 | 第10页 |
| ·IL-15对NK细胞的作用 | 第10-11页 |
| 2 猪细小病毒研究进展 | 第11-15页 |
| ·细小病毒流行学特点 | 第11页 |
| ·细小病毒病原学特征 | 第11-12页 |
| ·细小病毒的基因结构 | 第12-13页 |
| ·基因组编码蛋白 | 第13-14页 |
| ·结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14页 |
| ·细小病毒疫苗研究进展 | 第14-15页 |
| ·灭活疫苗 | 第14页 |
| ·弱毒疫苗 | 第14-15页 |
| ·基因工程疫苗 | 第15页 |
| 3 猪圆环病毒2型概述 | 第15-19页 |
| ·猪圆环病毒的流行学特征 | 第16页 |
| ·猪圆环病毒的病原学特征 | 第16-17页 |
| ·PCV2分子生物学特征 | 第17-18页 |
| ·PCV2的分子结构 | 第17-18页 |
| ·PCV2编码蛋白研究进展 | 第18页 |
| ·PCV2疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 4 核酸疫苗进展 | 第19-22页 |
| ·核酸疫苗的诞生以及作用机理 | 第19-20页 |
| ·核酸疫苗的特点 | 第20-21页 |
| ·核酸疫苗在动物免疫方面的应用 | 第21-22页 |
| 5 实验目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 实验部分 | 第23-51页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶液的配置 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-36页 |
| ·VP2基因的PCR、克隆以及鉴定 | 第24-27页 |
| ·VP2引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·PPV病毒基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·VP2的PCR扩增以及产物回收 | 第25页 |
| ·感受态E.coli DH5α细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·连接与转化 | 第26页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·PCV2基因的PCR、克隆与鉴定 | 第27-28页 |
| ·PCV2引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·质粒PMD-ORF2的抽提 | 第27页 |
| ·ORF2的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·感受态E.coli DH5α细胞的制备 | 第28页 |
| ·连接与转化以及重组质粒的筛选 | 第28页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第28页 |
| ·真核表达载体PCI-ORF2-VP2的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| ·PMD-ORF2-VP2的构建 | 第28-29页 |
| ·PMD-PRF2PVP2 的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第29页 |
| ·PCI-neo的提取和酶切 | 第29页 |
| ·连接与转化 | 第29页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第29-30页 |
| ·猪IL-15的PCR、克隆以及鉴定 | 第30-31页 |
| ·质粒PET32a-IL15的抽提 | 第30页 |
| ·猪IL-15引物的设计 | 第30页 |
| ·IL-15的PCR扩增以及产物回收 | 第30页 |
| ·感受态E.coli DH5α细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接与转化以及重组质粒的筛选 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·重组真核表达质粒PCI-IL15-ORF2-VP2的构建 | 第31-32页 |
| ·IL-15基因的酶切回收与PCI-ORF2-VP2开环载体的制备 | 第31页 |
| ·连接与转化 | 第31页 |
| ·重组质粒PCR鉴定与酶切 | 第31-32页 |
| ·PCI-IL15-ORF2-VP2与PCI-ORF2-VP2的转染PK15细胞 | 第32页 |
| ·免疫原性研究 | 第32-35页 |
| ·去内毒素重组质粒的大量抽提与纯化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的免疫 | 第33页 |
| ·外周血T淋巴细胞CD_4~+、CD_8~+的数量检测 | 第33-34页 |
| ·脾细胞增殖实验(MTT) | 第34页 |
| ·PPV抗体检测 | 第34-35页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第35页 |
| ·安全性检测 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-45页 |
| ·PMD-VP2的构建 | 第36-37页 |
| ·PPV VP2基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·PMD-VP2的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·序列测定 | 第37页 |
| ·PMD-ORF2质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·ORF2基因的PCR | 第37页 |
| ·PMD-ORF2的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·重组质粒PMD-ORF2-VP2的构建 | 第38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定及酶切鉴定 | 第38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·真核表达质粒PCI-ORF2-VP2的鉴定 | 第38-39页 |
| ·PMD-IL15的构建 | 第39-40页 |
| ·IL-15基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·PMD-IL15的PCR鉴定与酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列测定 | 第40页 |
| ·重组真核表达质粒PMd-IL15-ORF2-VP2的鉴定 | 第40-41页 |
| ·2.6 PCI-15-ORF2-VP2、PCI-ORF2-VP2转染PK15细胞荧光检测 | 第41页 |
| ·外周血T淋巴细胞CD4+、CD8+的数量检测 | 第41-42页 |
| ·CD＿4~+变化检测 | 第41-42页 |
| ·CD_8~+动态变化检测 | 第42页 |
| ·脾细胞增值实验(MTT) | 第42-43页 |
| ·PPV抗体检测 | 第43-44页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第44-45页 |
| ·安全性检测 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·核酸疫苗的构建 | 第45-47页 |
| ·目的基因的选择 | 第45-46页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第46页 |
| ·目的基因与真核表达载体的连接 | 第46-47页 |
| ·核酸疫苗的安全性 | 第47页 |
| ·核酸疫苗的免疫原性 | 第47-48页 |
| ·核酸疫苗的免疫途径以及优化 | 第48-49页 |
| ·细胞因子作为核酸疫苗佐剂研究 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-60页 |
