中文摘要 | 第4-6页 |
英文摘要 | 第6-7页 |
符号说明 | 第10-11页 |
1 前言 | 第11-14页 |
2 材料与方法 | 第14-28页 |
2.1 实验材料 | 第14-15页 |
2.1.1 细胞系 | 第14页 |
2.1.2 主要试剂 | 第14-15页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第15页 |
2.2 实验方法 | 第15-28页 |
2.2.1 细胞培养 | 第15-16页 |
2.2.2 贴壁细胞总RNA的提取 | 第16页 |
2.2.3 总RNA的鉴定 | 第16-17页 |
2.2.4 cDNA第一链的生成 | 第17-19页 |
2.2.5 实时荧光定量PCR | 第19-20页 |
2.2.6 Western-blot实验 | 第20-22页 |
2.2.7 转染 | 第22-23页 |
2.2.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第23-27页 |
2.2.9 统计学处理 | 第27-28页 |
3 结果及分析 | 第28-38页 |
3.1 靶基因的生物信息学方法分析 | 第28-30页 |
3.1.1 TargetScan查询 | 第28-29页 |
3.1.2 microRNA.org查询 | 第29页 |
3.1.3 mIRecords软件分析 | 第29-30页 |
3.2 五种不同大肠癌细胞系miR-190和DPC4的表达 | 第30-33页 |
3.2.1 RNA提取以及质量检测 | 第30-31页 |
3.2.2 Real-time PCR检测miR-190和DPC4 mRNA的表达 | 第31-33页 |
3.2.3 Western-blot检测DPC4蛋白的表达 | 第33页 |
3.3 Mimics和inhibitor细胞转染实验 | 第33-36页 |
3.3.1 Real-time PCR检测miR-190、DPC4 mRNA表达的改变 | 第34-35页 |
3.3.2 Western-blot检测DPC4蛋白表达的改变 | 第35-36页 |
3.4 靶基因的双荧光素酶报告基因实验验证 | 第36-38页 |
4 讨论 | 第38-41页 |
5 结论 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-44页 |
综述 | 第44-50页 |
参考文献 | 第48-50页 |
致谢 | 第50页 |