中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
前言 | 第10-13页 |
材料和试剂 | 第13-16页 |
1. 材料 | 第13页 |
1.1 细胞 | 第13页 |
1.2 质粒 | 第13页 |
1.3 病毒 | 第13页 |
2. 试剂 | 第13-15页 |
3. 常用溶液 | 第15-16页 |
方法 | 第16-34页 |
1. 细胞培养 | 第16页 |
2. 细胞转染 | 第16-17页 |
3. Trizol裂解细胞和细胞总RNA提取 | 第17-18页 |
4. 反转录合成细胞总cDNA | 第18-19页 |
5. Realtime荧光PCR反应 | 第19-20页 |
6. WB检测目的蛋白表达 | 第20-22页 |
7. 免疫沉淀法(Immunoprecipitation,IP)检测STING蛋白的泛素化 | 第22页 |
8. rTV-fluc病毒复制能力的检测 | 第22-23页 |
9. STING基因的克隆 | 第23-26页 |
10. 质粒的大量提取及定量 | 第26-27页 |
11. STING蛋白赖氨酸定点突变 | 第27-30页 |
12. 不同类型DNA的制备 | 第30-32页 |
12.1 线性质粒pcDNA3.1 | 第30页 |
12.2 不同长度DNA片段 | 第30-31页 |
12.3 细胞基因组DNA | 第31页 |
12.4 病毒基因组DNA | 第31-32页 |
13. 数据处理和分析 | 第32-34页 |
结果 | 第34-56页 |
第一节 dsDNA转染可降低MRC-5细胞中STING蛋白水平 | 第34-37页 |
1. 质粒DNA转染可降低MRC-5细胞中STING蛋白水平 | 第34-35页 |
2. 多种类型dsDNA均能引起STING蛋白水平降低 | 第35页 |
3. RNA类似物PolyI:C不能引起STING蛋白水平降低 | 第35-37页 |
第二节 STING蛋白与RIG-I、IL-6及IFN-β之间的关系研究 | 第37-46页 |
1. STING蛋白促进RIG-I、IL-6以及IFN-β的表达 | 第37-39页 |
2. RIG-I、IL-6和IFN-β对STING蛋白降解的调节 | 第39-43页 |
3. RIG-I、IL-6和IFN-β之间以及与STING蛋白之间的相互关系 | 第43-46页 |
第三节 STING蛋白的降解机制研究 | 第46-52页 |
1. STING蛋白水平下降不是发生在转录水平 | 第46页 |
2. 蛋白酶体抑制剂Bortezomib可抑制STING蛋白的降解 | 第46-47页 |
3. IP检测STING蛋白发生泛素化修饰 | 第47页 |
4. E3连接酶RNF5不参与STING蛋白降解 | 第47-49页 |
5. STING蛋白中的赖氨酸残基可能并不是泛素化位点 | 第49-51页 |
6. ISG修饰抑制STING蛋白降解 | 第51-52页 |
第四节 STING蛋白降解调控机制在其他细胞中的情况 | 第52-56页 |
1. 对另外两种人二倍体细胞及脐带间充质干细胞的研究 | 第52-53页 |
2. 对传代细胞系的研究 | 第53-56页 |
讨论 | 第56-62页 |
小结 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-67页 |
附录1:主要仪器设备 | 第67-68页 |
附录2:缩略语 | 第68-69页 |
附录3:STING蛋白上可能的非常规泛素化位点 | 第69-70页 |
说明 | 第70-72页 |
论文综述 | 第72-100页 |
参考文献 | 第87-100页 |
博士期间发表的论文 | 第100-101页 |
致谢 | 第101-102页 |