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双链DNA诱导细胞STING蛋白降解及调节机制研究

中文摘要第5-7页
Abstract第7-9页
前言第10-13页
材料和试剂第13-16页
    1. 材料第13页
        1.1 细胞第13页
        1.2 质粒第13页
        1.3 病毒第13页
    2. 试剂第13-15页
    3. 常用溶液第15-16页
方法第16-34页
    1. 细胞培养第16页
    2. 细胞转染第16-17页
    3. Trizol裂解细胞和细胞总RNA提取第17-18页
    4. 反转录合成细胞总cDNA第18-19页
    5. Realtime荧光PCR反应第19-20页
    6. WB检测目的蛋白表达第20-22页
    7. 免疫沉淀法(Immunoprecipitation,IP)检测STING蛋白的泛素化第22页
    8. rTV-fluc病毒复制能力的检测第22-23页
    9. STING基因的克隆第23-26页
    10. 质粒的大量提取及定量第26-27页
    11. STING蛋白赖氨酸定点突变第27-30页
    12. 不同类型DNA的制备第30-32页
        12.1 线性质粒pcDNA3.1第30页
        12.2 不同长度DNA片段第30-31页
        12.3 细胞基因组DNA第31页
        12.4 病毒基因组DNA第31-32页
    13. 数据处理和分析第32-34页
结果第34-56页
    第一节 dsDNA转染可降低MRC-5细胞中STING蛋白水平第34-37页
        1. 质粒DNA转染可降低MRC-5细胞中STING蛋白水平第34-35页
        2. 多种类型dsDNA均能引起STING蛋白水平降低第35页
        3. RNA类似物PolyI:C不能引起STING蛋白水平降低第35-37页
    第二节 STING蛋白与RIG-I、IL-6及IFN-β之间的关系研究第37-46页
        1. STING蛋白促进RIG-I、IL-6以及IFN-β的表达第37-39页
        2. RIG-I、IL-6和IFN-β对STING蛋白降解的调节第39-43页
        3. RIG-I、IL-6和IFN-β之间以及与STING蛋白之间的相互关系第43-46页
    第三节 STING蛋白的降解机制研究第46-52页
        1. STING蛋白水平下降不是发生在转录水平第46页
        2. 蛋白酶体抑制剂Bortezomib可抑制STING蛋白的降解第46-47页
        3. IP检测STING蛋白发生泛素化修饰第47页
        4. E3连接酶RNF5不参与STING蛋白降解第47-49页
        5. STING蛋白中的赖氨酸残基可能并不是泛素化位点第49-51页
        6. ISG修饰抑制STING蛋白降解第51-52页
    第四节 STING蛋白降解调控机制在其他细胞中的情况第52-56页
        1. 对另外两种人二倍体细胞及脐带间充质干细胞的研究第52-53页
        2. 对传代细胞系的研究第53-56页
讨论第56-62页
小结第62-63页
参考文献第63-67页
附录1:主要仪器设备第67-68页
附录2:缩略语第68-69页
附录3:STING蛋白上可能的非常规泛素化位点第69-70页
说明第70-72页
论文综述第72-100页
    参考文献第87-100页
博士期间发表的论文第100-101页
致谢第101-102页

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