| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第16-68页 |
| 1.1 流行性脑脊髓膜炎及脑膜炎奈瑟球菌 | 第16-21页 |
| 1.1.1 流行性脑脊髓膜炎 | 第16-18页 |
| 1.1.2 脑膜炎奈瑟球菌 | 第18-21页 |
| 1.2 脑膜炎奈瑟球菌疫苗 | 第21-34页 |
| 1.2.1 多糖疫苗 | 第21-22页 |
| 1.2.2 多糖结合疫苗 | 第22-23页 |
| 1.2.3 多糖结合疫苗的免疫机制 | 第23-24页 |
| 1.2.4 多糖结合疫苗的长期保护 | 第24-25页 |
| 1.2.5 多糖结合疫苗的关键要素 | 第25-31页 |
| 1.2.5.1 多糖 | 第25-26页 |
| 1.2.5.2 载体蛋白 | 第26-27页 |
| 1.2.5.3 偶联化学 | 第27-30页 |
| 1.2.5.4 多糖蛋白比 | 第30-31页 |
| 1.2.6 载体诱导的表位抑制 | 第31-34页 |
| 1.3 聚乙二醇 | 第34-35页 |
| 1.4 已上市的脑膜炎球菌多糖结合疫苗 | 第35-37页 |
| 1.5 结核病与结核分枝杆菌 | 第37-41页 |
| 1.5.1 结核病现状 | 第37-38页 |
| 1.5.2 结核分枝杆菌 | 第38-41页 |
| 1.6 结核分枝杆菌对人体免疫反应的逃逸 | 第41-44页 |
| 1.6.1 侵染巨噬细胞 | 第41-42页 |
| 1.6.2 抑制吞噬体的成熟 | 第42-43页 |
| 1.6.3 结核分枝杆菌从吞噬体中的逃逸 | 第43页 |
| 1.6.4 结核分枝杆菌诱导巨噬细胞的凋亡 | 第43-44页 |
| 1.7 抗结核分枝杆菌免疫作用机制 | 第44-52页 |
| 1.7.1 粘膜免疫 | 第46-47页 |
| 1.7.2 CD4~+ T细胞 | 第47-48页 |
| 1.7.3 CD8~+ T细胞 | 第48-49页 |
| 1.7.4 γδT细胞 | 第49页 |
| 1.7.5 CD1限制性αβT细胞 | 第49-50页 |
| 1.7.6 抗体 | 第50-52页 |
| 1.8 TB新型疫苗研究进展 | 第52-58页 |
| 1.8.1 病毒载体疫苗 | 第53-54页 |
| 1.8.2 DNA疫苗 | 第54页 |
| 1.8.3 重组BCG疫苗 | 第54-55页 |
| 1.8.4 重组Mtb疫苗 | 第55页 |
| 1.8.5 单位疫苗 | 第55-58页 |
| 1.9 TB新型疫苗的候选抗原 | 第58-59页 |
| 1.9.1 Ag85复合物 | 第58-59页 |
| 1.9.2 结核分枝杆菌潜伏期表达的抗原 | 第59页 |
| 1.10 佐剂 | 第59-63页 |
| 1.10.1 聚肌胞Poly(I：C) | 第61-62页 |
| 1.10.2 阿拉伯半乳聚糖 | 第62-63页 |
| 1.11 递送方式 | 第63-64页 |
| 1.12 论文的立题思想 | 第64-68页 |
| 2 含不同连接桥多糖结合疫苗的制备、结构表征及免疫原性研究 | 第68-104页 |
| 2.1 引言 | 第68-70页 |
| 2.2 实验材料及设备 | 第70-71页 |
| 2.3 实验方法 | 第71-82页 |
| 2.3.1 TT粗品的分离纯化 | 第71页 |
| 2.3.2 不同连接桥多糖结合疫苗的制备与纯化 | 第71-73页 |
| 2.3.2.1 多糖的活化 | 第71-72页 |
| 2.3.2.2 破伤风类毒素的巯基化 | 第72页 |
| 2.3.2.3 多糖与破伤风类毒素的偶联 | 第72页 |
| 2.3.2.4 多糖结合疫苗的分离纯化 | 第72-73页 |
| 2.3.3 多糖结合疫苗的结构鉴定及分析 | 第73-78页 |
| 2.3.3.1 总糖量的测定 | 第73-74页 |
| 2.3.3.2 游离多糖的测定 | 第74页 |
| 2.3.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第74-75页 |
| 2.3.3.4 破伤风类毒素巯基化程度的测定 | 第75-76页 |
| 2.3.3.5 多糖马来酰亚胺衍化程度的测定 | 第76-77页 |
| 2.3.3.6 凝胶过滤高效液相色谱分析 | 第77页 |
| 2.3.3.7 ~1H核磁共振光谱 | 第77-78页 |
| 2.3.3.8 荧光光谱 | 第78页 |
| 2.3.3.9 圆二色光谱 | 第78页 |
| 2.3.3.10 动态光散射 | 第78页 |
| 2.3.4 多糖结合疫苗免疫原性分析 | 第78-82页 |
| 2.3.4.1 动物免疫 | 第78-79页 |
| 2.3.4.2 PS-BSA结合物的制备 | 第79页 |
| 2.3.4.3 血清中抗PS抗体滴度的测定 | 第79-81页 |
| 2.3.4.4 抗体特异性检测 | 第81页 |
| 2.3.4.5 抗体亲合力测定 | 第81-82页 |
| 2.3.4.6 数据统计学分析 | 第82页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第82-103页 |
| 2.4.1 破伤风类毒素粗品的纯化 | 第82-83页 |
| 2.4.2 不同连接桥多糖结合疫苗的制备与纯化 | 第83-88页 |
| 2.4.2.1 多糖的衍化 | 第83-84页 |
| 2.4.2.2 破伤风类毒素的巯基化 | 第84-87页 |
| 2.4.2.3 结合产物的分离纯化 | 第87-88页 |
| 2.4.3 多糖结合疫苗理化性质的检测 | 第88-95页 |
| 2.4.3.1 凝胶过滤高效液相色谱 | 第88-89页 |
| 2.4.3.2 多糖蛋白比 | 第89-90页 |
| 2.4.3.3 游离多糖含量及多糖回收率 | 第90-91页 |
| 2.4.3.4 动态光散射 | 第91页 |
| 2.4.3.5 圆二色光谱 | 第91-92页 |
| 2.4.3.6 荧光光谱 | 第92-93页 |
| 2.4.3.7 ~1H核磁共振光谱 | 第93-95页 |
| 2.4.4 免疫原性检测 | 第95-103页 |
| 2.4.4.1 PS特异性IgG滴度及亚型检测 | 第96-97页 |
| 2.4.4.2 TT特异性IgG滴度及亚型检测 | 第97-99页 |
| 2.4.4.3 PS特异性IgG抗体持效性 | 第99-100页 |
| 2.4.4.4 抗PS抗体特异性检测 | 第100-101页 |
| 2.4.4.5 抗PS抗体亲合力测定 | 第101-103页 |
| 2.5 本章小结 | 第103-104页 |
| 3 基于阿拉伯半乳聚糖-poly(I：C)修饰的结核分枝杆菌亚单位疫苗 | 第104-132页 |
| 3.1 引言 | 第104-106页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第106-107页 |
| 3.3 实验方法 | 第107-123页 |
| 3.3.1 重组融合蛋白Ag85B-HspX表达E.coli BL21菌株的构建 | 第107-116页 |
| 3.3.1.1 PCR法合成带Linker的Ag85B及HspX单基因 | 第107-109页 |
| 3.3.1.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第109页 |
| 3.3.1.3 目的基因片段的回收及纯化 | 第109-111页 |
| 3.3.1.4 重叠PCR法合成Ag85B-HspX融合基因 | 第111页 |
| 3.3.1.5 AH基因的回收及纯化 | 第111页 |
| 3.3.1.6 AH基因及pET26b质粒的双酶切及连接 | 第111-114页 |
| 3.3.1.7 连接产物转化Top10感受态细胞 | 第114-115页 |
| 3.3.1.8 阳性克隆菌株的筛选 | 第115页 |
| 3.3.1.9 小量质粒的提取及测序鉴定 | 第115-116页 |
| 3.3.1.10 质粒转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第116页 |
| 3.3.2 重组融合蛋白AH的表达、复性及分离纯化 | 第116-118页 |
| 3.3.2.1 重组融合蛋白AH的诱导与表达 | 第116-117页 |
| 3.3.2.2 AH包涵体的透析复性 | 第117-118页 |
| 3.3.2.3 重组融合蛋白AH的分离纯化 | 第118页 |
| 3.3.3 AH与不同佐剂偶联产物的制备 | 第118-120页 |
| 3.3.3.1 Poly(I：C)的衍化 | 第118页 |
| 3.3.3.2 佐剂AG-P与疫苗AH-AG的制备 | 第118-119页 |
| 3.3.3.3 疫苗AH-P与AH-AG-P的制备 | 第119-120页 |
| 3.3.4 检测方法 | 第120-123页 |
| 3.3.4.1 还原性SDS-PAGE | 第120-122页 |
| 3.3.4.2 Poly(I：C)的定量 | 第122-123页 |
| 3.3.4.3 凝胶过滤层析高效液相色谱 | 第123页 |
| 3.3.4.4 MALDI-TOF法测定AH分子量 | 第123页 |
| 3.3.4.5 动态光散射 | 第123页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第123-130页 |
| 3.4.1 单基因A_(linker)、H_(linker)及融合基因AH的PCR扩增 | 第123-124页 |
| 3.4.2 重组质粒pET26b-AH的序列测定 | 第124-125页 |
| 3.4.3 重组融合蛋白AH的诱导表达与分离纯化 | 第125-127页 |
| 3.4.4 疫苗中佐剂含量的测定 | 第127-128页 |
| 3.4.5 凝胶过滤高效液相色谱 | 第128-129页 |
| 3.4.6 动态光散射分析AH及其衍生物 | 第129-130页 |
| 3.5 本章小结 | 第130-132页 |
| 4 结核分枝杆菌亚单位疫苗的免疫原性和药学性质研究 | 第132-160页 |
| 4.1 引言 | 第132-133页 |
| 4.2 实验材料及设备 | 第133-134页 |
| 4.3 实验方法 | 第134-140页 |
| 4.3.1 结核分枝杆菌亚单位疫苗免疫原性 | 第134-137页 |
| 4.3.1.1 动物免疫 | 第134页 |
| 4.3.1.2 血清中抗体滴度测定 | 第134页 |
| 4.3.1.3 抗AH抗体特异性检测 | 第134-135页 |
| 4.3.1.4 脾细胞的细胞因子分泌水平检测 | 第135-136页 |
| 4.3.1.5 脾细胞增殖水平 | 第136-137页 |
| 4.3.1.6 流式技术分析脾脏中CD4~+T及CD8~+T细胞 | 第137页 |
| 4.3.2 药代及药效动力学性质 | 第137-140页 |
| 4.3.2.1 动物实验方案 | 第137-138页 |
| 4.3.2.2 抗AH多克隆抗体的制备 | 第138页 |
| 4.3.2.3 酶标抗体的制备 | 第138-139页 |
| 4.3.2.4 药代动力学分析 | 第139-140页 |
| 4.3.2.5 药效动力学分析 | 第140页 |
| 4.3.3 统计学分析 | 第140页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第140-157页 |
| 4.4.1 抗体水平检测 | 第140-145页 |
| 4.4.1.1 AH特异性IgG抗体滴度测定 | 第140-143页 |
| 4.4.1.2 抗AH抗体特异性检测 | 第143-144页 |
| 4.4.1.3 佐剂特异性IgG抗体滴度测定 | 第144-145页 |
| 4.4.2 脾细胞增殖水平测定 | 第145-146页 |
| 4.4.3 流式技术分析脾脏中CD4~+T及CD8~+T细胞 | 第146-148页 |
| 4.4.4 脾细胞培养上清细胞因子水平测定 | 第148-152页 |
| 4.4.5 药代动力学 | 第152-157页 |
| 4.4.5.1 抗AH多克隆抗体的纯化 | 第152-153页 |
| 4.4.5.2 酶标抗体的制备 | 第153-154页 |
| 4.4.5.3 药代动力学 | 第154-157页 |
| 4.4.6 药效动力学 | 第157页 |
| 4.5 本章小结 | 第157-160页 |
| 5 结论与展望 | 第160-164页 |
| 5.1 本论文的研究结果 | 第160-162页 |
| 5.2 本论文的创新点 | 第162页 |
| 5.3 展望 | 第162-164页 |
| 符号表 | 第164-166页 |
| 参考文献 | 第166-182页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第182-184页 |
| 致谢 | 第184页 |
