| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 转基因抗虫作物发展现状 | 第13-14页 |
| 1.2 苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白及其作用机制 | 第14-18页 |
| 1.2.1 杀虫晶体蛋白 | 第14页 |
| 1.2.2 营养期杀虫蛋白 | 第14-18页 |
| 1.3 转vip基因抗虫植物的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究意义和目的 | 第19-20页 |
| 第二章 研究内容和技术路线 | 第20-21页 |
| 2.1 研究内容 | 第20页 |
| 2.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 第三章 5个转vip3A基因水稻抗虫性鉴定 | 第21-34页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第21-22页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 3.1.2 基因、菌株和载体 | 第21页 |
| 3.1.3 主要化学试剂和酶 | 第21页 |
| 3.1.4 常用试剂配制 | 第21页 |
| 3.1.5 供试虫源 | 第21-22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 3.2.1 vip3Aa1基因片段获得 | 第22页 |
| 3.2.2 vip3Ad2基因片段获得 | 第22页 |
| 3.2.3 SBR基因片段获得 | 第22-23页 |
| 3.2.4 vip3Aa Ad1基因片段获得 | 第23页 |
| 3.2.5 vip3Aa Ad2基因片段获得 | 第23-24页 |
| 3.2.6 5个vip3A基因的植物表达载体构建 | 第24-25页 |
| 3.2.7 5个vip3A基因转化水稻 | 第25-26页 |
| 3.2.8 5个vip3A基因转基因植株阳性株鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2.9 离体叶片法进行转基因植株生物测定 | 第27-28页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 3.3.1 5个vip3A基因的获得 | 第28页 |
| 3.3.2 5个vip3A基因植物表达载体构建 | 第28-29页 |
| 3.3.3 5个转vip3A基因植株阳性鉴定 | 第29-32页 |
| 3.3.4 5个转vip3A基因植株的抗虫性分析 | 第32-33页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 5个Vip3A蛋白对胰蛋白酶敏感性分析及杀虫活性鉴定 | 第34-43页 |
| 4.1 材料与方法 | 第34页 |
| 4.1.1 载体与菌株 | 第34页 |
| 4.1.2 主要化学试剂和酶 | 第34页 |
| 4.1.3 常用试剂的配制 | 第34页 |
| 4.1.4 供试虫源 | 第34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 4.2.1 5个vip3A基因原核表达载体构建 | 第34-35页 |
| 4.2.2 5 个Vip3A蛋白原核表达 | 第35页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第35-37页 |
| 4.2.4 5个Vip3A蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第37页 |
| 4.2.5 Western Blot步骤 | 第37页 |
| 4.2.6 胰蛋白酶敏感性实验 | 第37-38页 |
| 4.2.7 Vip3A试纸条检测 | 第38页 |
| 4.2.8 杀虫活性初步鉴定 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 4.3.1 5个vip3A基因原核表达载体构建 | 第38页 |
| 4.3.2 5个Vip3A蛋白诱导纯化和Western blot检测 | 第38-40页 |
| 4.3.3 5个Vip3A蛋白胰蛋白酶敏感性分析 | 第40-42页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 5个Vip3A双色荧光蛋白植物表达载体和原核表达载体构建 | 第43-51页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第43页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第43页 |
| 5.1.2 基因、菌株和载体 | 第43页 |
| 5.1.3 主要化学试剂和酶 | 第43页 |
| 5.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 5.2.1 5个vip3A基因融合双色荧光基因植物表达载体构建 | 第43-44页 |
| 5.2.2 5个vip3A基因融合双色荧光基因植物表达载体转化水稻 | 第44页 |
| 5.2.3 5个vip3A基因融合双色荧光基因转基因植株鉴定 | 第44页 |
| 5.2.4 5个vip3A基因融合双色荧光基因原核表达载体构建 | 第44页 |
| 5.2.5 5个Vip3A双色荧光蛋白诱导表达 | 第44-45页 |
| 5.2.6 5个Vip3A双色荧光蛋白胰蛋白敏感性分析 | 第45页 |
| 5.2.7 5个vip3A基因融合双色荧光基因转基因植株和诱导原核表达蛋白喂食昆虫 | 第45页 |
| 5.3 结果与分析 | 第45-50页 |
| 5.3.1 5个vip3A基因融合双色荧光基因植物表达载体构建 | 第45-46页 |
| 5.3.2 5个vip3A基因融合双色荧光基因转基因水稻阳性植株鉴定 | 第46-48页 |
| 5.3.3 5个vip3A基因融合双色荧光基因原核表达载体构建 | 第48页 |
| 5.3.4 5个vip3A基因融合双色荧光基因原核表达及Vip3A试纸条鉴定 | 第48-49页 |
| 5.3.5 5个Vip3A双色荧光蛋白与胰蛋白酶消化反应 | 第49-50页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 第六章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
