| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·植物耐铝研究进展 | 第9-13页 |
| ·铝毒的存在形式 | 第9页 |
| ·铝毒的作用位点 | 第9页 |
| ·铝毒的作用机制 | 第9-11页 |
| ·植物的耐铝机制 | 第11-12页 |
| ·有机酸对于铝毒的作用 | 第12-13页 |
| ·紫花苜蓿耐铝研究进展 | 第13页 |
| ·柠檬酸合成酶研究进展 | 第13-15页 |
| ·本实验的研究意义与目的 | 第15页 |
| 2 柠檬酸合成酶基因 MSCS 的克隆 | 第15-33页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·生化试剂 | 第16页 |
| ·引物 | 第16-17页 |
| ·实验仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-26页 |
| ·材料的获得 | 第17页 |
| ·总 RNA 的提取（TRIZOL法） | 第17-18页 |
| ·保守序列的克隆 | 第18-19页 |
| ·RACE 克隆 | 第19-23页 |
| ·PCR 产物切胶回收 | 第23-24页 |
| ·载体连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24页 |
| ·单克隆挑取、培养及PCR 检测 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-32页 |
| ·紫花苜蓿总 RNA 的提取 | 第26页 |
| ·柠檬酸合成酶基因保守序列的引物设计及序列的获得 | 第26-27页 |
| ·基因5’端序列的克隆 | 第27-28页 |
| ·基因3’端序列的克隆 | 第28-29页 |
| ·MSCS 基因的CDNA 全序列的获得及序列分析 | 第29-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 3 柠檬酸合成酶基因植物载体的构建 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·载体与菌株 | 第33页 |
| ·酶与主要试剂 | 第33页 |
| ·试剂盒 | 第33页 |
| ·培养基的配置 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·目的片段全长的扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段扩增产物的回收、纯化 | 第34页 |
| ·目的片段的回收、纯化 | 第34-35页 |
| ·表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·结果分析 | 第36-37页 |
| ·目的片段的克隆 | 第36页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37页 |
| 4 柠檬酸合成酶基因对烟草的转化 | 第37-42页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料及载体 | 第37页 |
| ·载体 | 第37页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第38页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第38-39页 |
| ·烟草转化（叶盘法） | 第39页 |
| ·转基因植株的检测 | 第39-40页 |
| ·转基因植株总 DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·目的基因 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·农杆菌转化效果的检测 | 第40-41页 |
| ·再生植株的获得 | 第41-42页 |
| ·转基因植株的检测 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| 5 结论与展望 | 第42-44页 |
| ·实验结论 | 第42-43页 |
| ·创新点 | 第43页 |
| ·展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |