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AQP9基因在水牛卵泡颗粒细胞中的表达及其与细胞凋亡的初步研究

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-10页
英文缩略词第14-15页
第一部分 文献综述第15-27页
    第一章 水通道蛋白概述第16-23页
        1 水通道蛋白的发现、命名与分类第16-17页
        2 水通道蛋白分子结构特征第17-19页
        3 水通道蛋白的表达调控第19页
        4 水通道蛋白在雌雄生殖系统中的分布及生理功能第19-21页
        5 水通道与卵泡发育第21页
        6 水通道与胚胎发育第21-22页
        7 水通道与细胞凋亡第22-23页
    第二章 PKC信号通路概述第23-27页
        1 PKC的定义、分类及结构第23页
        2 PKC信号通路的功能第23-26页
            2.1 PKC信号通路与细胞增殖第23-24页
            2.2 PKC信号通路与细胞凋亡第24-25页
            2.3 PKC信号通路与细胞缝隙连接第25-26页
        3 PKC信号通路与哺乳动物卵泡发育第26-27页
            3.1 PKC与颗粒细胞增殖第26页
            3.2 PKC与卵母细胞成熟第26-27页
实验目的及意义第27-28页
第二部分 试验研究第28-68页
    第一章 水牛AQP9基因克隆及生物信息学分析第29-40页
        1 材料与方法第30-34页
            1.1 材料和试剂第30-31页
                1.1.1 实验材料第30页
                1.1.2 主要实验试剂第30页
                1.1.3 主要设备第30页
                1.1.4 主要溶液配制第30页
                1.1.5 主要生物信息分析软件第30-31页
            1.2 方法第31-34页
                1.2.1 Trizol试剂法提取总RNA第31页
                1.2.2 cDNA第一链合成第31-32页
                1.2.3 引物设计和合成第32页
                1.2.4 AQP9编码区序列的PCR扩增第32-33页
                1.2.5 目的片段胶回收、TA克隆及鉴定第33-34页
        2 结果与分析第34-38页
            2.1 水牛AQP9基因的克隆与鉴定第34-35页
            2.2 水牛AQP9基因序列分析第35-38页
        3 分析与讨论第38-39页
        4 结论第39-40页
    第二章 水牛AQP9基因在雌性生殖细胞中表达的初步研究第40-53页
        1 材料与方法第41-47页
            1.1 材料第41-42页
                1.1.1 实验材料第41页
                1.1.2 主要试剂第41页
                1.1.3 主要仪器设备第41页
                1.1.4 主要溶液配制第41-42页
            1.2 方法第42-46页
                1.2.1 组织切片制作与免疫组化试验第42-43页
                1.2.2 颗粒细胞的分离培养第43页
                1.2.3 细胞免疫荧光试验第43-44页
                1.2.4 蛋白免疫印迹试验第44页
                1.2.5 水牛卵母细胞体外成熟培养第44页
                1.2.6 水牛卵母细胞孤雌激活第44页
                1.2.7 不同闭锁程度卵泡颗粒细胞的收集第44-45页
                1.2.8 不同成熟质量卵丘细胞的培养与收集第45页
                1.2.9 qRT-PCR引物设计与合成第45页
                1.2.10 微量细胞及胚胎反转第45-46页
                1.2.11 实时荧光定量PCR检测第46页
            1.3 数据统计与分析第46-47页
        2 结果与分析第47-51页
            2.1 AQP9蛋白在不同发育时期水牛卵泡中的表达分析第47页
            2.2 AQP9蛋白在体外培养的水牛颗粒细胞中的表达分析第47-48页
            2.3 水牛AQP9基因在卵母细胞成熟及早期孤雌胚胎发育过程中的表达分析.第48-49页
            2.4 AQP9基因在不同闭锁程度水牛卵泡颗粒细胞中的表达分析第49页
            2.5 AQP9基因在体外不同成熟质量卵丘颗粒细胞中的表达分析第49-51页
        3 讨论第51-52页
        4 结论第52-53页
    第三章 水牛颗粒细胞凋亡与AQP9表达的初步研究第53-68页
        1 材料与方法第54-59页
            1.1 材料第54-55页
                1.1.1 试验材料第54页
                1.1.2 主要试剂第54页
                1.1.3 主要仪器设备第54页
                1.1.4 主要溶液配制第54-55页
            1.2 方法第55-58页
                1.2.1 水牛颗粒细胞无血清培养第55页
                1.2.2 载体构建与鉴定第55-56页
                1.2.3 去内毒素质粒提取第56-57页
                1.2.4 细胞转染第57页
                1.2.5 过表达AQP9颗粒细胞的无血清培养第57页
                1.2.6 添加PKC抑制剂Staurosporine培养水牛颗粒细胞第57-58页
                1.2.7 颗粒细胞凋亡检测第58页
                1.2.8 qRT-PCR引物设计与合成第58页
                1.2.9 颗粒细胞总RNA的提取及反转录第58页
                1.2.10 实时荧光定量PCR检测第58页
            1.3 数据统计与分析第58-59页
        2 结果与分析第59-66页
            2.1 无血清培养水牛颗粒细胞对AQP9及凋亡相关基因表达的影响第59页
            2.2 水牛颗粒细胞过表达AQP9基因对凋亡相关基因表达的影响第59-62页
                2.2.1 AQP9基因表达载体的构建及酶切鉴定结果第59-60页
                2.2.2 AQP9基因重组质粒转染水牛颗粒细胞结果第60-62页
                2.2.3 AQP9基因过表达对颗粒细胞凋亡相关基因表达的影响第62页
                2.2.4 无血清培养过表达AQP9水牛颗粒细胞对凋亡相关基因表达的影响第62页
            2.3 水牛颗粒细胞凋亡与AQP9表达的研究第62-66页
                2.3.1 Staurosporine对体外培养水牛颗粒细胞形态的影响第62-63页
                2.3.2 Staurosporine对水牛颗粒细胞凋亡的影响第63-65页
                2.3.3 凋亡水牛颗粒细胞中AQP9及调亡相关基因的表达分析第65-66页
        3 讨论第66-67页
        4 结论第67-68页
全文结论第68-69页
参考文献第69-78页
致谢第78-79页
攻读硕士期间发表学术论文第79页

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