| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 英文缩略词 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-27页 |
| 第一章 水通道蛋白概述 | 第16-23页 |
| 1 水通道蛋白的发现、命名与分类 | 第16-17页 |
| 2 水通道蛋白分子结构特征 | 第17-19页 |
| 3 水通道蛋白的表达调控 | 第19页 |
| 4 水通道蛋白在雌雄生殖系统中的分布及生理功能 | 第19-21页 |
| 5 水通道与卵泡发育 | 第21页 |
| 6 水通道与胚胎发育 | 第21-22页 |
| 7 水通道与细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 第二章 PKC信号通路概述 | 第23-27页 |
| 1 PKC的定义、分类及结构 | 第23页 |
| 2 PKC信号通路的功能 | 第23-26页 |
| 2.1 PKC信号通路与细胞增殖 | 第23-24页 |
| 2.2 PKC信号通路与细胞凋亡 | 第24-25页 |
| 2.3 PKC信号通路与细胞缝隙连接 | 第25-26页 |
| 3 PKC信号通路与哺乳动物卵泡发育 | 第26-27页 |
| 3.1 PKC与颗粒细胞增殖 | 第26页 |
| 3.2 PKC与卵母细胞成熟 | 第26-27页 |
| 实验目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二部分 试验研究 | 第28-68页 |
| 第一章 水牛AQP9基因克隆及生物信息学分析 | 第29-40页 |
| 1 材料与方法 | 第30-34页 |
| 1.1 材料和试剂 | 第30-31页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第30页 |
| 1.1.3 主要设备 | 第30页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第30页 |
| 1.1.5 主要生物信息分析软件 | 第30-31页 |
| 1.2 方法 | 第31-34页 |
| 1.2.1 Trizol试剂法提取总RNA | 第31页 |
| 1.2.2 cDNA第一链合成 | 第31-32页 |
| 1.2.3 引物设计和合成 | 第32页 |
| 1.2.4 AQP9编码区序列的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 1.2.5 目的片段胶回收、TA克隆及鉴定 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.1 水牛AQP9基因的克隆与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2 水牛AQP9基因序列分析 | 第35-38页 |
| 3 分析与讨论 | 第38-39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第二章 水牛AQP9基因在雌性生殖细胞中表达的初步研究 | 第40-53页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| 1.1 材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第41页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第41-42页 |
| 1.2 方法 | 第42-46页 |
| 1.2.1 组织切片制作与免疫组化试验 | 第42-43页 |
| 1.2.2 颗粒细胞的分离培养 | 第43页 |
| 1.2.3 细胞免疫荧光试验 | 第43-44页 |
| 1.2.4 蛋白免疫印迹试验 | 第44页 |
| 1.2.5 水牛卵母细胞体外成熟培养 | 第44页 |
| 1.2.6 水牛卵母细胞孤雌激活 | 第44页 |
| 1.2.7 不同闭锁程度卵泡颗粒细胞的收集 | 第44-45页 |
| 1.2.8 不同成熟质量卵丘细胞的培养与收集 | 第45页 |
| 1.2.9 qRT-PCR引物设计与合成 | 第45页 |
| 1.2.10 微量细胞及胚胎反转 | 第45-46页 |
| 1.2.11 实时荧光定量PCR检测 | 第46页 |
| 1.3 数据统计与分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-51页 |
| 2.1 AQP9蛋白在不同发育时期水牛卵泡中的表达分析 | 第47页 |
| 2.2 AQP9蛋白在体外培养的水牛颗粒细胞中的表达分析 | 第47-48页 |
| 2.3 水牛AQP9基因在卵母细胞成熟及早期孤雌胚胎发育过程中的表达分析. | 第48-49页 |
| 2.4 AQP9基因在不同闭锁程度水牛卵泡颗粒细胞中的表达分析 | 第49页 |
| 2.5 AQP9基因在体外不同成熟质量卵丘颗粒细胞中的表达分析 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 4 结论 | 第52-53页 |
| 第三章 水牛颗粒细胞凋亡与AQP9表达的初步研究 | 第53-68页 |
| 1 材料与方法 | 第54-59页 |
| 1.1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1.1 试验材料 | 第54页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第54页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第54-55页 |
| 1.2 方法 | 第55-58页 |
| 1.2.1 水牛颗粒细胞无血清培养 | 第55页 |
| 1.2.2 载体构建与鉴定 | 第55-56页 |
| 1.2.3 去内毒素质粒提取 | 第56-57页 |
| 1.2.4 细胞转染 | 第57页 |
| 1.2.5 过表达AQP9颗粒细胞的无血清培养 | 第57页 |
| 1.2.6 添加PKC抑制剂Staurosporine培养水牛颗粒细胞 | 第57-58页 |
| 1.2.7 颗粒细胞凋亡检测 | 第58页 |
| 1.2.8 qRT-PCR引物设计与合成 | 第58页 |
| 1.2.9 颗粒细胞总RNA的提取及反转录 | 第58页 |
| 1.2.10 实时荧光定量PCR检测 | 第58页 |
| 1.3 数据统计与分析 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-66页 |
| 2.1 无血清培养水牛颗粒细胞对AQP9及凋亡相关基因表达的影响 | 第59页 |
| 2.2 水牛颗粒细胞过表达AQP9基因对凋亡相关基因表达的影响 | 第59-62页 |
| 2.2.1 AQP9基因表达载体的构建及酶切鉴定结果 | 第59-60页 |
| 2.2.2 AQP9基因重组质粒转染水牛颗粒细胞结果 | 第60-62页 |
| 2.2.3 AQP9基因过表达对颗粒细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第62页 |
| 2.2.4 无血清培养过表达AQP9水牛颗粒细胞对凋亡相关基因表达的影响 | 第62页 |
| 2.3 水牛颗粒细胞凋亡与AQP9表达的研究 | 第62-66页 |
| 2.3.1 Staurosporine对体外培养水牛颗粒细胞形态的影响 | 第62-63页 |
| 2.3.2 Staurosporine对水牛颗粒细胞凋亡的影响 | 第63-65页 |
| 2.3.3 凋亡水牛颗粒细胞中AQP9及调亡相关基因的表达分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间发表学术论文 | 第79页 |
