| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略词 | 第15-17页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-38页 |
| 综述一 布鲁氏菌病发病的分子机制研究 | 第18-38页 |
| 1 布鲁氏菌生物学特征 | 第18-19页 |
| 2 布鲁氏菌的致病机制 | 第19-31页 |
| 2.1 布鲁氏菌的侵袭和胞内生存 | 第19-22页 |
| 2.2 布鲁氏菌毒力相关因子 | 第22-27页 |
| 2.3 布鲁氏菌与细胞凋亡 | 第27-29页 |
| 2.4 布鲁氏菌与细胞自噬 | 第29-31页 |
| 3 布鲁氏菌免疫机制 | 第31-32页 |
| 4 PI3K/AKT信号转导通路 | 第32-38页 |
| 第二章 实验部分 | 第38-142页 |
| 实验一 布鲁氏菌对PI3K/AKT信号通路的激活 | 第38-56页 |
| 摘要 | 第38-39页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 2 结果 | 第44-53页 |
| 2.1 羊种布鲁氏菌 16M对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第44-45页 |
| 2.2 不同MOI的 16M对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第45-47页 |
| 2.3 粗糙型和光滑型菌株对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第47-48页 |
| 2.4 粗糙型和光滑型菌株的LPS对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第48-50页 |
| 2.5 抑制剂LY对 16M介导的PI3K/Akt信号通路的阻断 | 第50-51页 |
| 2.6 抑制剂LY对巨噬细胞活性的影响 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 3.1 PI3K/Akt信号通路与疾病的关系 | 第53页 |
| 3.2 布鲁氏菌对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第53-54页 |
| 3.3 脂多糖在激活PI3K/Akt信号通路中的作用 | 第54页 |
| 3.4 外膜蛋白对PI3K/Akt信号通路的激活 | 第54-56页 |
| 实验二 阻断PI3K/AKT信号通路对羊种布鲁氏菌 16M存活的影响 | 第56-74页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 1.1 材料 | 第57页 |
| 1.2 方法 | 第57-60页 |
| 2 结果 | 第60-71页 |
| 2.1 阻断PI3K/Akt信号通路抑制 16M的内化 | 第60-61页 |
| 2.2 阻断PI3K/Akt信号通路抑制 16M的胞内繁殖 | 第61-62页 |
| 2.3 阻断PI3K/Akt信号通路诱导 16M介导的IFN-γ、IL-12p70 和TNF-α的产生 | 第62-63页 |
| 2.4 LY在小鼠体内阻断 16M介导的PI3K/Akt信号通路 | 第63-64页 |
| 2.5 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导的小鼠产生的细胞因子的影响 | 第64-65页 |
| 2.6 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导的小鼠体内细胞亚群CD4+T和CD8+T细胞的影响 | 第65-67页 |
| 2.8 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M导致的小鼠内脏病理变化的影响 | 第67-68页 |
| 2.9 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M在小鼠体内存活的影响 | 第68-69页 |
| 2.10 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M导致的小鼠致死率的影响 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| 3.1 细胞因子与布鲁氏菌感染 | 第71-72页 |
| 3.2 CD4~+和CD8~+T细胞与布鲁氏菌感染 | 第72-73页 |
| 3.3 布鲁氏菌导致机体的病理变化 | 第73-74页 |
| 实验三 阻断PI3K/AKT信号通路对羊种布鲁氏菌 16M介导细胞凋亡的影响 | 第74-99页 |
| 摘要 | 第74-75页 |
| 1 材料与方法 | 第75-80页 |
| 1.1 材料 | 第75页 |
| 1.2 方法 | 第75-80页 |
| 2 结果 | 第80-95页 |
| 2.1 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导caspase-3、caspase-8 和caspase-9 活性的影响 | 第80-83页 |
| 2.2 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导凋亡相关基因的影响 | 第83-85页 |
| 2.3 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导凋亡相关蛋白的影响 | 第85-87页 |
| 2.4 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M介导细胞凋亡率的影响 | 第87-89页 |
| 2.5 抑制剂Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk和LY对细胞活性的影响。 | 第89-90页 |
| 2.6 Z-DEVD-fmk和Z-LEHD-fmk对 16M介导的caspase-3 和caspase-9 活性的影响 | 第90-91页 |
| 2.8 抑制剂Z-DEVD-fmk、Z-IETD-fmk、Z-LEHD-fmk对LY诱导 16M介导的细胞凋亡率的影响 | 第91-93页 |
| 2.9 抑制caspase-3 或caspase-9 活性对 16M介导的p-Akt(S473)表达的影响 | 第93-95页 |
| 3 讨论 | 第95-99页 |
| 3.1 病原菌与细胞凋亡 | 第95-96页 |
| 3.2 Akt与细胞凋亡 | 第96页 |
| 3.3 PARP与细胞凋亡 | 第96-97页 |
| 3.4 Caspase途径与细胞凋亡 | 第97-99页 |
| 实验四 阻断PI3K/AKT信号通路对羊种布鲁氏菌 16M介导细胞自噬的影响 | 第99-117页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| 1 材料与方法 | 第100-105页 |
| 1.1 材料 | 第100页 |
| 1.2 方法 | 第100-105页 |
| 2 结果 | 第105-114页 |
| 2.1 Plex-MSC-EGFP-LC3 质粒的酶切验证 | 第105-106页 |
| 2.2 慢病毒的包装及转染效果观察 | 第106-107页 |
| 2.3 阻断PI3K/Akt信号通路对 16M诱导的细胞中GFP-LC3 阳性点数的影响 | 第107-108页 |
| 2.4 阻断PI3K/Akt信号通路对自噬相关基因mRNA水平的影响 | 第108-110页 |
| 2.5 阻断PI3K/Akt信号通路对自噬相关基因蛋白水平的影响 | 第110-111页 |
| 2.6 阻断PI3K/Akt信号通路对LysoTracker和LC3 共定位的影响 | 第111-112页 |
| 2.7 阻断PI3K/Akt信号通路对细胞中的自噬泡影响 | 第112-114页 |
| 3 讨论 | 第114-117页 |
| 3.1 细胞自噬利于布鲁氏菌的存活 | 第114页 |
| 3.2 LC3 蛋白与细胞自噬 | 第114-115页 |
| 3.3 自噬溶酶体途径与布鲁氏感染 | 第115页 |
| 3.4 PI3K/Akt信号通路与细胞自噬 | 第115-117页 |
| 实验五 PI3K催化亚基P110Α在羊种布鲁氏菌 16M侵染巨噬细胞过程中的功能 | 第117-142页 |
| 摘要 | 第117-118页 |
| 1 材料与方法 | 第118-123页 |
| 1.1 材料 | 第118页 |
| 1.2 方法 | 第118-123页 |
| 2 结果 | 第123-139页 |
| 2.1 pLentiLox-siRNA载体的构建 | 第123页 |
| 2.2 慢病毒干扰载体的包装及转染效果观察 | 第123-124页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR检测干扰片段抑制效果 | 第124-126页 |
| 2.4 沉默p110α基因对巨噬细胞活性的影响 | 第126页 |
| 2.5 沉默p110α基因对 16M激活PI3K/Akt信号通路的影响 | 第126-127页 |
| 2.6 沉默p110α基因对 16M在巨噬细胞中内化的影响 | 第127-128页 |
| 2.7 沉默p110α基因对 16M在巨噬细胞内存活的影响 | 第128-129页 |
| 2.8 沉默p110α基因对 16M介导的凋亡相关基因的影响 | 第129-132页 |
| 2.9 沉默p110α基因对 16M介导的细胞凋亡率的影响 | 第132-134页 |
| 2.10 沉默p110α基因对 16M自噬相关基因表达的影响 | 第134-135页 |
| 2.11 沉默p110α基因对 16M凋亡和自噬相关蛋白表达的影响 | 第135-139页 |
| 3 讨论 | 第139-142页 |
| 3.1 RNA干扰机制 | 第139-140页 |
| 3.2 RNA干扰慢病毒载体的优点 | 第140页 |
| 3.3 PI3K亚单位结构 | 第140-141页 |
| 3.4 P13Kp110α的功能 | 第141-142页 |
| 全文结论 | 第142-143页 |
| 创新点 | 第143-144页 |
| 参考文献 | 第144-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 个人简介 | 第157-159页 |
| 附件 | 第159页 |
