| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 PEDV研究概述 | 第14-17页 |
| 1.1 病毒的形态结构 | 第14页 |
| 1.2 基因组的结构特点 | 第14-15页 |
| 1.3 PEDV S基因及S蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 PEDV细胞受体研究 | 第16页 |
| 1.5 PEDV致病机理 | 第16页 |
| 1.6 PEDV流行情况 | 第16-17页 |
| 2 PEDV预防研究进展 | 第17-20页 |
| 2.1 PEDV灭活苗 | 第17页 |
| 2.2 PEDV弱毒苗 | 第17-18页 |
| 2.3 PEDV基因工程疫苗 | 第18-19页 |
| 2.4 抗PEDV抗体 | 第19页 |
| 2.5 PEDV单链抗体 | 第19-20页 |
| 2.6 抗PEDV植物提取物 | 第20页 |
| 3 减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究 | 第20-23页 |
| 3.1 沙门氏菌的入侵机制 | 第20-21页 |
| 3.2 减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究 | 第21页 |
| 3.3 减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的应用 | 第21-23页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 研究部分 | 第24-60页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1 菌株、毒株及实验动物 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-39页 |
| 2.1 PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的克隆 | 第25-29页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第25页 |
| 2.1.2 PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的扩增 | 第25-27页 |
| 2.1.3 PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.1.4 克隆重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2 重组质粒PVAX-S_(499-650)、PVAX-S_(499-789)的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.1 真核表达质粒的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.2 真核表达质粒的真核转染与表达 | 第30-31页 |
| 2.3 携带PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的减毒沙门氏菌的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.1 减毒沙门氏菌SL7207感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.2 减毒沙门氏菌SL7207的电转化 | 第32页 |
| 2.3.3 重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第32页 |
| 2.4 重组减毒沙门氏菌的生物学特性研究 | 第32-35页 |
| 2.4.1 重组减毒沙门氏菌的生长曲线测定 | 第32页 |
| 2.4.2 重组减毒沙门氏菌的体外稳定性测定 | 第32-33页 |
| 2.4.3 重组减毒沙门氏菌的体内稳定性测定及目的基因转录分析 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组减毒沙门氏菌的体内增殖测定及安全性分析 | 第34-35页 |
| 2.5 重组减毒沙门氏菌的免疫学特性研究 | 第35-38页 |
| 2.5.1 仔猪的分组及免疫 | 第35页 |
| 2.5.2 样品的采集 | 第35页 |
| 2.5.3 外周血T淋巴细胞增殖实验 | 第35-36页 |
| 2.5.4 血清抗体IgG的测定 | 第36页 |
| 2.5.5 黏膜抗体IgA的测定 | 第36-37页 |
| 2.5.6 特异性抗体的病毒中和实验 | 第37页 |
| 2.5.7 免疫仔猪血清IFN-γ的测定 | 第37-38页 |
| 2.5.8 免疫仔猪血清IL-4的测定 | 第38页 |
| 2.6 实验数据的分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-55页 |
| 3.1 PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3.1.1 PEDV S_(499-650)、S_(499-789)基因的扩增 | 第39页 |
| 3.1.2 克隆重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 重组质粒PVAX-S_(499-650)、PVAX-S_(499-789)的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.1 携带S基因的两种真核表达载体的鉴定 | 第40页 |
| 3.2.2 表达产物的免疫荧光鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 表达产物的Western-blotting鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第42页 |
| 3.4 重组减毒沙门氏菌的生物学特性研究 | 第42-46页 |
| 3.4.1 重组减毒沙门氏菌的生长曲线测定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 重组减毒沙门氏菌的体外稳定性测定 | 第43页 |
| 3.4.3 重组减毒沙门氏菌的体内稳定性测定及目的基因转录分析 | 第43-45页 |
| 3.4.4 重组减毒沙门氏菌的体内增殖测定及安全性分析 | 第45-46页 |
| 3.5 重组减毒沙门氏菌的免疫学特性研究 | 第46-55页 |
| 3.5.1 外周血T淋巴细胞增殖实验 | 第46-48页 |
| 3.5.2 血清抗体IgG的测定 | 第48-49页 |
| 3.5.3 黏膜抗体IgA的测定 | 第49-50页 |
| 3.5.4 特异性抗体的病毒中和实验 | 第50-52页 |
| 3.5.5 免疫仔猪血清IFN-γ的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.6 免疫仔猪血清IL-4的测定 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 目的基因的选择 | 第55页 |
| 4.2 关于减毒沙门氏菌及质粒的选择 | 第55-56页 |
| 4.3 目的基因在体内外的表达 | 第56页 |
| 4.4 关于重组疫苗的安全性及稳定性分析 | 第56-57页 |
| 4.5 关于重组疫苗的仔猪免疫原性研究 | 第57-58页 |
| 4.6 关于本研究的创新点与不足 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
