| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩写词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-30页 |
| 1.1 病原体与宿主的相互作用 | 第18页 |
| 1.2 TLRs和mTOR信号通路 | 第18-25页 |
| 1.2.1 TLRs的结构及种类 | 第18-20页 |
| 1.2.2 细胞表面的TLRs及其配体 | 第20-21页 |
| 1.2.3 TLR信号转导通路及调控分子 | 第21-23页 |
| 1.2.4 mTOR及其复合物 | 第23-24页 |
| 1.2.5 mTOR信号通路及功能 | 第24-25页 |
| 1.2.6 TLRs/mTOR信号通路 | 第25页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌及其病原相关分子模式 | 第25-28页 |
| 1.3.1 金黄色葡萄球菌的免疫原特异性 | 第25-27页 |
| 1.3.2 肽聚糖及其TLR1/2受体 | 第27-28页 |
| 1.3.2.1 肽聚糖的结构及功能 | 第27页 |
| 1.3.2.2 TLR2的特点及功能 | 第27-28页 |
| 1.4 小鼠巨噬细胞和奶牛乳腺上皮细胞在免疫应答研究方面的应用 | 第28页 |
| 1.5 比较蛋白质组学在病原体与宿主细胞相互作用研究中的应用 | 第28-30页 |
| 第二章 mTORC1在肽聚糖诱导炎性因子表达中的调控作用与机制 | 第30-49页 |
| 2.1 肽聚糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1分泌炎性因子 | 第30-36页 |
| 2.1.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1.1 实验细胞 | 第30页 |
| 2.1.1.2 主要试剂,抗体与耗材 | 第30-31页 |
| 2.1.2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1.2.1 Ana-1细胞的培养 | 第31-32页 |
| 2.1.2.2 肽聚糖配制 | 第32页 |
| 2.1.2.3 肽聚糖刺激小鼠巨噬细胞 | 第32-33页 |
| 2.1.2.4 细胞因子的检测 | 第33-34页 |
| 2.1.2.5 数据统计 | 第34页 |
| 2.1.3 结果 | 第34-36页 |
| 2.1.3.1 肽聚糖诱导巨噬细胞分泌细胞因子具有剂量依赖性 | 第34-35页 |
| 2.1.3.2 肽聚糖诱导巨噬细胞分泌细胞因子具有时间依赖性 | 第35-36页 |
| 2.1.3.3 mTORC1介导肽聚糖诱导的炎性因子表达 | 第36页 |
| 2.2 肽聚糖诱导Ana-1细胞增殖并激活mTOR信号通路 | 第36-43页 |
| 2.2.1 材料 | 第36-38页 |
| 2.2.1.1 实验细胞 | 第36页 |
| 2.2.1.2 主要试剂,抗体与耗材 | 第36-37页 |
| 2.2.1.3 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.2.1.4 溶液配方及配制 | 第37-38页 |
| 2.2.2 方法 | 第38-41页 |
| 2.2.2.1 细胞系和肽聚糖配制 | 第38页 |
| 2.2.2.2 肽聚糖刺激小鼠巨噬细胞 | 第38页 |
| 2.2.2.3 提取总蛋白 | 第38-39页 |
| 2.2.2.4 制备样品 | 第39页 |
| 2.2.2.5 SDS-PAGE | 第39-40页 |
| 2.2.2.6 Western blot | 第40-41页 |
| 2.2.2.7 MTT法测定细胞增殖 | 第41页 |
| 2.2.2.8 数据统计 | 第41页 |
| 2.2.3 结果 | 第41-43页 |
| 2.2.3.1 肽聚糖激活mTORC1信号通路和转录因子NF-KB | 第41-42页 |
| 2.2.3.2 Rapamycin抑制肽聚糖诱导的Ana-1细胞增殖 | 第42-43页 |
| 2.3 TLR1/2介导肽聚糖诱导的mTORC1和转录因子NF-κB,STAT3活化及炎性因子表达 | 第43-47页 |
| 2.3.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.3.1.1 实验细胞 | 第43页 |
| 2.3.1.2 主要试剂,抗体与耗材 | 第43-44页 |
| 2.3.1.3 溶液配方及配制 | 第44页 |
| 2.3.2 方法 | 第44-45页 |
| 2.3.2.1 细胞系和肽聚糖配制 | 第44页 |
| 2.3.2.2 TLR受体封闭及肽聚糖刺激小鼠巨噬细胞 | 第44-45页 |
| 2.3.2.3 ELISA及Western blot操作 | 第45页 |
| 2.3.2.4 数据统计 | 第45页 |
| 2.3.3 结果 | 第45-47页 |
| 2.3.3.1 TLR1/2封闭减弱肽聚糖诱导的细胞因子分泌 | 第45-46页 |
| 2.3.3.2 TLR1/2封闭抑制肽聚糖诱导的mTORC1和转录因子NF-κB,STAT3活性 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌(S.aureus)侵染牛乳腺上皮细胞的比较蛋白质组学研究 | 第49-69页 |
| 3.1 材料 | 第49-51页 |
| 3.1.1 实验细胞系 | 第49页 |
| 3.1.2 实验用的细菌 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要试剂,耗材与抗体 | 第50页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第50页 |
| 3.1.5 实验溶液配制 | 第50-51页 |
| 3.2 方法 | 第51-55页 |
| 3.2.1 菌株培养及保存 | 第51页 |
| 3.2.2 菌落计数 | 第51页 |
| 3.2.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第51-52页 |
| 3.2.4 细胞数计 | 第52页 |
| 3.2.5 侵染条件优化 | 第52页 |
| 3.2.6 细菌侵染后的菌落计数 | 第52-53页 |
| 3.2.7 蛋白样品制备与质量检测 | 第53-54页 |
| 3.2.8 iTRAQ蛋白质组测定 | 第54-55页 |
| 3.2.9 比较蛋白质组分析和筛选 | 第55页 |
| 3.3 结果 | 第55-68页 |
| 3.3.1 最佳MOI及侵染时间的确定 | 第55-56页 |
| 3.3.2 蛋白质组样品的制备与SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| 3.3.3 蛋白质组的基本信息统计 | 第57-58页 |
| 3.3.4 比较蛋白质组的信息学分析 | 第58-62页 |
| 3.3.4.1 比较蛋白质组的基本信息分析 | 第58-59页 |
| 3.3.4.2 比较蛋白质组的功能分析 | 第59-62页 |
| 3.3.5 与金黄色葡萄球菌侵染及与mTORC1相关的蛋白质的筛选 | 第62-68页 |
| 3.3.5.1 与mTORC1相关的蛋白质的筛选 | 第62-63页 |
| 3.3.5.2 金黄色葡萄球菌侵染相关的蛋白质的筛选 | 第63-64页 |
| 3.3.5.3 与金黄色葡萄球菌侵染并与mTORC1相关的蛋白质筛选 | 第64-66页 |
| 3.3.5.4 与金黄色葡萄球菌侵染相关并受mTORC1调控的蛋白质筛选 | 第66-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第80页 |
