| 摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第16-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第16-19页 |
| 1.1.1 Myo G基因的定位和结构 | 第16页 |
| 1.1.2 Myo G基因的作用机制 | 第16-18页 |
| 1.1.3 Myo G基因的表达调控 | 第18-19页 |
| 1.2 本论文的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 牛MDSCs分化阶段差异miRNA和mRNA表达谱的构建 | 第21-50页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 牛MDSCs的分离与培养 | 第22-23页 |
| 2.3.2 牛MDSCs成肌诱导分化及鉴定 | 第23页 |
| 2.3.3 牛MDSCs总RNA的提取及质量检测 | 第23-24页 |
| 2.3.4 牛MDSCs分化过程的mi RNA和mRNA测序 | 第24-25页 |
| 2.3.5 mi RNA和m RNA差异分析 | 第25页 |
| 2.3.6 mi RNA实时荧光定量RT-PCR检测 | 第25-28页 |
| 2.4 结果 | 第28-45页 |
| 2.4.1 牛MDSCs的分化及鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4.2 牛MDSCs总RNA的提取及质量检测 | 第30页 |
| 2.4.3 牛MDSCs增殖分化过程中mi RNA高通量测序 | 第30-41页 |
| 2.4.4 牛MDSCs增殖分化过程中m RNA高通量测序 | 第41-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-48页 |
| 2.5.1 MDSCs分化鉴定 | 第45-46页 |
| 2.5.2 MDSCs分化过程中保守miRNA的鉴定 | 第46页 |
| 2.5.3 MDSCs分化过程中候选miRNA的鉴定 | 第46-47页 |
| 2.5.4 牛MDSCs分化过程中差异表达的mi RNA | 第47-48页 |
| 2.6 本章小结 | 第48-50页 |
| 3 miR-2400对Myo G基因表达调控作用 | 第50-83页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 材料与方法 | 第50-53页 |
| 3.2.1 细胞株、菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第50-51页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第51页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第51-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-66页 |
| 3.3.1 MDSCs细胞培养 | 第53页 |
| 3.3.2 mi R-2400过表达载体构建 | 第53-55页 |
| 3.3.3 细胞转染 | 第55-56页 |
| 3.3.4 mi R-2400靶基因验证 | 第56-60页 |
| 3.3.5 mi R-2400对牛MDSCs增殖的影响 | 第60-62页 |
| 3.3.6 mi R-2400表达模式的验证 | 第62-66页 |
| 3.3.7 统计分析 | 第66页 |
| 3.4 结果 | 第66-80页 |
| 3.4.1 mi R-2400在牛MDSCs分化不同时期表达 | 第66页 |
| 3.4.2 mi R-2400靶基因验证 | 第66-72页 |
| 3.4.3 mi R-2400对牛MDSCs增殖的影响 | 第72-77页 |
| 3.4.4 mi R-2400表达模式验证 | 第77-80页 |
| 3.5 讨论 | 第80-82页 |
| 3.5.1 mi R-2400靶向MyoG 3′ UTR下调其表达 | 第80-81页 |
| 3.5.2 mi R-2400促进MDSCs增殖 | 第81页 |
| 3.5.3 mi R-2400的表达模式 | 第81-82页 |
| 3.6 本章小结 | 第82-83页 |
| 4 EGR1对Myo G基因表达调控作用 | 第83-110页 |
| 4.1 引言 | 第83页 |
| 4.2 材料与方法 | 第83-84页 |
| 4.2.1 细胞株、菌株和质粒 | 第83页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第83-84页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第84页 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 | 第84页 |
| 4.3 实验方法 | 第84-93页 |
| 4.3.1 q RT-PCR和Western blot检测分化不同时期EGR1基因的表达 | 第84页 |
| 4.3.2 免疫荧光检测分化不同时期EGR1基因的表达及其定位 | 第84-85页 |
| 4.3.3 EGR1干扰载体的构建 | 第85-87页 |
| 4.3.4 EGR1过表达慢病毒载体构建 | 第87-88页 |
| 4.3.5 干扰和过表达EGR1对肌分化标志分子Myo G和MHC的影响 | 第88页 |
| 4.3.6 EGR1干扰和过表达对MDSCs增殖和细胞周期的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.7 Myo G基因启动子上EGR1结合位点验证 | 第89-93页 |
| 4.3.8 数据分析 | 第93页 |
| 4.4 结果 | 第93-107页 |
| 4.4.1 EGR1基因在MDSCs分化不同时期表达及定位 | 第93-95页 |
| 4.4.2 EGR1基因干扰效果和过表达效果验证 | 第95-98页 |
| 4.4.3 干扰和过表达EGR1对Myo G基因及分化的影响 | 第98-102页 |
| 4.4.4 干扰和过表达EGR1对牛MDSCs增殖和细胞周期的影响 | 第102-105页 |
| 4.4.5 Myo G基因启动子Ch IP检测结果 | 第105-107页 |
| 4.5 讨论 | 第107-108页 |
| 4.6 本章小结 | 第108-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第122页 |
