| 名词缩写 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 综述 | 第11-15页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸的酶法合成 | 第11-13页 |
| ·融合表达载体 | 第13页 |
| ·正选择表达载体 | 第13-15页 |
| 第2章 N-乙酰-D-神经氨酸的酶法合成 | 第15-39页 |
| 第一节 N-乙酰-D-神经氨酸合成酶的克隆、表达及纯化 | 第15-32页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·引物表和构建的质粒表 | 第17-19页 |
| ·方法 | 第19-23页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸合成酶基因的克隆 | 第19-20页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸合成酶的诱导表达 | 第20-22页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸合成酶的纯化 | 第22-23页 |
| ·结果 | 第23-30页 |
| ·不同来源N-乙酰-D-神经氨酸合成酶基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第24-27页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸合成酶的表达和纯化结果 | 第27-29页 |
| ·蛋白浓度标准曲线的建立 | 第29-30页 |
| ·蛋白浓度及产量 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第二节 合成N-乙酰-D-神经氨酸相关酶的活性测定 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·蛋白表达菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂的配置 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·不同来源的醛缩酶(Ald)活性的比较 | 第33-34页 |
| ·不同来源的合成酶(NeuB)活性的比较 | 第34页 |
| ·不同来源的异构酶活性的比较 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·TBA法测定神经氨酸含量标准曲线的建立 | 第35页 |
| ·三种醛缩酶活性的比较 | 第35-36页 |
| ·不同合成酶活性的比较 | 第36页 |
| ·不同异构酶活性的比较 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 伴侣蛋白融合表达载体的构建 | 第39-49页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·质粒 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·主要试剂及缓冲液 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·引物表 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·伴侣蛋白基因的扩增 | 第41页 |
| ·伴侣蛋白融合表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·外源基因与伴侣蛋白基因融合表达菌株的构建 | 第42-43页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第43页 |
| ·制备蛋白胶及SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-48页 |
| ·伴侣蛋白融合表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·外源基因克隆至伴侣蛋白融合表达载体 | 第45页 |
| ·不同伴侣蛋白的融合表达的比较 | 第45-46页 |
| ·启动因子融合表达分析 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第4章 改进型正选择表达载体的构建 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·菌株 | 第49-50页 |
| ·质粒 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·主要试剂及缓冲液 | 第50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·引物表 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·pPAE和pPAE-MBP载体的构建 | 第50-51页 |
| ·E.coli DH10B/pPAE及E.coli DH10B/pPAE-MBP的抗性测试 | 第51页 |
| ·蛋白表达及SDS-PAGE | 第51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·pPAE和pPAE-MBP的构建及表型验证 | 第51-52页 |
| ·pPAE和pPAE-MBP克隆效率的检测 | 第52页 |
| ·克隆至pPAE和pPAE-MBP的外源基因的高效表达 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
| 感谢以下基金项目的支持 | 第59页 |
