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真菌多糖诱导肝癌细胞系凋亡的初探及对EHV-1疫苗的免疫调节作用

摘要第1-6页
Abstract第6-17页
1 绪论第17-36页
   ·课题背景第17-18页
     ·课题来源第17页
     ·课题的目的和意义第17-18页
   ·国内外研究进展第18-35页
     ·桑黄的研究概况第18-21页
     ·灵芝的研究概况第21-26页
     ·黑木耳研究概况第26-28页
     ·药用真菌与癌症治疗第28-30页
     ·线粒体凋亡通路第30-35页
   ·研究的主要内容第35-36页
2 桑黄多糖抑制肝癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的作用第36-52页
   ·实验材料与仪器第36-39页
     ·材料第36页
     ·试剂第36-37页
     ·仪器第37页
     ·试剂配制及培养基第37-39页
   ·实验方法第39-42页
     ·细胞培养第39页
     ·桑黄多糖的提取及含量测定第39-40页
     ·小鼠淋巴细胞增值率测定第40-41页
     ·桑黄多糖分离与纯化第41页
     ·细胞增殖试验第41页
     ·细胞活力试验第41页
     ·软琼脂克隆试验第41页
     ·细胞粘附试验第41-42页
     ·细胞侵袭试验第42页
     ·细胞周期检测试验第42页
     ·数据统计学分析第42页
   ·结果与分析第42-49页
     ·桑黄粗多糖的提取分离第42-44页
     ·小鼠淋巴细胞增值率测定第44页
     ·粗多糖PLP60的纯化第44-45页
     ·PLP60-B1组分对HepG2细胞增殖的抑制作用第45-47页
     ·软琼脂克隆试验第47页
     ·多糖PLP60-B1组分对HepG2细胞粘附和侵袭的抑制作用第47-48页
     ·流式细胞术检测HepG2细胞周期分布第48-49页
   ·讨论第49-50页
   ·本章小结第50-52页
3 桑黄多糖对EHV-1疫苗免疫Balb/c鼠的免疫调节作用第52-66页
   ·实验材料与仪器第53-54页
     ·材料第53页
     ·试剂与培养基第53-54页
     ·仪器第54页
   ·实验方法第54-60页
     ·桑黄多糖的提取第54页
     ·疫苗EHV-1的制备第54-56页
     ·病毒TCID_(50)测定第56-57页
     ·动物分组及处理第57页
     ·抗体效价的测定第57-59页
     ·T淋巴细胞亚群的检测第59页
     ·肺脏的病理观察第59页
     ·人工感染Balb/c小鼠病毒检测第59-60页
   ·结果与分析第60-64页
     ·桑黄多糖(PL)对EHV-1抗体效价的影响第60-61页
     ·桑黄多糖(PL)对外周血CD3~+淋巴细胞的影响第61页
     ·桑黄多糖(PL)对外周血CD4~+/CD8~+比值的影响第61-62页
     ·病理切片HE染色结果分析第62-63页
     ·攻毒后病毒检测情况第63-64页
   ·讨论第64-65页
   ·本章小结第65-66页
4 真菌多糖抑制肝癌细胞增殖信号通路的初探第66-84页
   ·实验材料第67-68页
     ·试验材料第67页
     ·试验试剂第67页
     ·抗体第67-68页
     ·实验仪器第68页
     ·试剂配制及培养基第68页
   ·实验方法第68-72页
     ·细胞培养第68-69页
     ·桑黄、灵芝和黑木耳多糖提取及含量测定第69页
     ·细胞增殖试验第69页
     ·细胞软琼脂克隆试验第69页
     ·电镜(TEM)试验第69页
     ·流式细胞术分析第69-70页
     ·细胞周期检测第70页
     ·蛋白质免疫印迹第70-72页
   ·结果与分析第72-80页
     ·真菌多糖对HepG2细胞增殖的抑制作用第72-73页
     ·真菌多糖对HepG2和Bel-7404细胞增殖的软琼脂试验第73-74页
     ·真菌多糖诱导HepG2和Bel-7404细胞凋亡试验第74-75页
     ·电镜观察真菌多糖诱导HepG2和Bel-7404细胞凋亡第75页
     ·细胞周期试验第75-77页
     ·HepG2和Bel-7404细胞中p21~(Cip1),p27~(Kip1)和cyclin/CDK的水平第77-78页
     ·HepG2和Bel-7404细胞中P13K/PTEN/AKT途径的表达水平第78-79页
     ·HepG2和Bel-7404细胞中线粒体途径的表达水平第79-80页
   ·讨论第80-82页
   ·本章小结第82-84页
5 真菌多糖调控HepG2细胞差异表达蛋白的鉴定与分析第84-102页
   ·实验材料与仪器第84-85页
     ·试验材料第84页
     ·试验试剂第84页
     ·实验仪器第84-85页
   ·实验方法第85-87页
     ·双向电泳的样品制备第85页
     ·跑胶第85页
     ·蛋白点分析第85-86页
     ·质谱的分析和鉴定第86页
     ·Western blot鉴定第86页
     ·实时荧光定量PCR第86-87页
   ·结果与分析第87-99页
     ·总蛋白质的表达谱第87-88页
     ·Imaging Master 2D凝胶图像分析第88-89页
     ·蛋白差异点的质谱鉴定第89-93页
     ·差异表达蛋白质细胞定位第93页
     ·验证试验第93-99页
   ·讨论第99-100页
   ·本章小结第100-102页
结论第102-104页
参考文献第104-118页
攻读学位期间发表的学术论文第118-119页
致谢第119-120页

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