| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词表 | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-38页 |
| 1.1 植物钙信号系统概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 植物的胞内钙信号 | 第13页 |
| 1.1.2 植物细胞内的钙离子稳态与钙库 | 第13-14页 |
| 1.2 植物细胞内的钙离子转运系统 | 第14-21页 |
| 1.2.1 钙离子的流入 | 第15-18页 |
| 1.2.2 钙离子的流出 | 第18-20页 |
| 1.2.3 细胞器对钙信号的调控 | 第20-21页 |
| 1.3 植物ANNEXINs蛋白 | 第21-23页 |
| 1.3.1 植物ANNEXINs的结构与功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 植物ANNEXINs与胁迫响应 | 第22-23页 |
| 1.4 水母荧光蛋白法检测细胞内钙离子浓度 | 第23-24页 |
| 1.4.1 重组水母荧光蛋白的钙离子浓度检测原理 | 第23-24页 |
| 1.4.2 重组水母荧光蛋白钙离子浓度检测法的优点和不足 | 第24页 |
| 1.5 植物胞内钙信号的解码和传递 | 第24-28页 |
| 1.5.1 钙调素和钙调素类似蛋白 | 第25-26页 |
| 1.5.2 SCaBP-PKS/CBL-CIPK家族 | 第26-27页 |
| 1.5.3 CDPK家族 | 第27-28页 |
| 1.6 植物胞内钙信号与胁迫响应 | 第28-35页 |
| 1.6.1 氧化胁迫下植物的钙信号响应 | 第28-29页 |
| 1.6.2 热胁迫下植物的钙信号响应 | 第29-31页 |
| 1.6.3 盐胁迫下植物的钙信号响应 | 第31-33页 |
| 1.6.4 碱胁迫下植物的钙信号响应 | 第33-34页 |
| 1.6.5 渗透胁迫下植物的钙信号响应 | 第34页 |
| 1.6.6 旱胁迫下植物的钙信号响应 | 第34-35页 |
| 1.6.7 冷胁迫下的植物钙信号响应 | 第35页 |
| 1.7 拟南芥转录因子MYB30 | 第35-37页 |
| 1.7.1 植物R2R3-MYB家族 | 第36页 |
| 1.7.2 植物MYB30蛋白的生理功能 | 第36页 |
| 1.7.3 MYB30的调控因子 | 第36-37页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第37-38页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第38-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.1.2 常用菌株和载体 | 第38页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第39-41页 |
| 2.2 常用培养基及溶液的配制 | 第41-49页 |
| 2.2.1 常用培养基的配制 | 第41-42页 |
| 2.2.2 常用试剂和缓冲液的配制 | 第42-43页 |
| 2.2.3 植物培养相关溶液液的配制 | 第43页 |
| 2.2.4 核酸电泳相关溶液的配制 | 第43-44页 |
| 2.2.5 钙信号检测相关溶液的配制 | 第44页 |
| 2.2.6 蛋白质免疫印迹(Western Blotting,WB)相关溶液的配制 | 第44-45页 |
| 2.2.7 原生质体转化相关溶液的配制 | 第45-46页 |
| 2.2.8 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)相关溶液的配制 | 第46-47页 |
| 2.2.9 His标签蛋白纯化相关溶液的配制 | 第47页 |
| 2.2.10 原核蛋白检测相关溶液 | 第47-48页 |
| 2.2.11 凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)相关溶液的配制 | 第48页 |
| 2.2.12 酵母单杂交实验相关溶液的配制 | 第48-49页 |
| 2.2.13 常用抗生素的配制 | 第49页 |
| 2.2.14 其它试剂与溶液的配制 | 第49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-66页 |
| 2.3.1 植物培养条件 | 第49-50页 |
| 2.3.2 钙离子浓度的测定 | 第50页 |
| 2.3.3 蛋白质免疫印迹(Western Blotting,WB) | 第50-51页 |
| 2.3.4 拟南芥的有性杂交 | 第51页 |
| 2.3.5 大肠杆菌DH5α电击感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 2.3.6 大肠杆菌DH5α感受态电击转化重组质粒 | 第52页 |
| 2.3.7 质粒DNA的小量提取(碱裂解法) | 第52-53页 |
| 2.3.8 质粒构建 | 第53-55页 |
| 2.3.9 转基因植株的获得 | 第55-56页 |
| 2.3.10 实时荧光定量PCR (Real-time RT-PCR,qPCR) | 第56-57页 |
| 2.3.11 CsCl密度梯度离心法纯化质粒 | 第57-58页 |
| 2.3.12 拟南芥原生质体的转化 | 第58-59页 |
| 2.3.13 荧光素酶的信号检测 | 第59页 |
| 2.3.14 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP) | 第59-60页 |
| 2.3.15 His标签融合蛋白的表达与纯化 | 第60-61页 |
| 2.3.16 凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA) | 第61-63页 |
| 2.3.17 酵母小量转化 | 第63页 |
| 2.3.18 拟南芥基因组DNA的提取 | 第63-64页 |
| 2.3.19 拟南芥突变体的鉴定 | 第64页 |
| 2.3.20 胁迫处理实验 | 第64-65页 |
| 2.3.21 LaCl_3和EGTA处理实验 | 第65-66页 |
| 2.3.22 叶绿素含量测定 | 第66页 |
| 2.4 引物 | 第66-70页 |
| 2.4.1 质粒构建引物 | 第66-67页 |
| 2.4.2 实时荧光定量PCR引物 | 第67-68页 |
| 2.4.3 凝胶阻滞实验探针引物 | 第68-69页 |
| 2.4.4 突变体鉴定引物 | 第69-70页 |
| 第三章 结果与分析 | 第70-105页 |
| 3.1 钙信号突变体的筛选与基因克隆 | 第70-75页 |
| 3.1.1 1128突变体的筛选与H_2O_2刺激下的钙表型观察 | 第70-71页 |
| 3.1.2 1128突变体的钙表型特异性分析 | 第71-72页 |
| 3.1.3 1128突变体的基因克隆和回补实验 | 第72-74页 |
| 3.1.4 MYB30过表达材料的构建与表型观察 | 第74-75页 |
| 3.2 MYB30蛋白负调控ANNEXINs基因的表达 | 第75-82页 |
| 3.2.1 MYB30负调控ANNEXINs基因的表达 | 第75-77页 |
| 3.2.2 MYB30不影响CAXs和Ca~(2+)-ATPases的表达 | 第77页 |
| 3.2.3 MYB30抑制ANNEXINs启动子的转录活性 | 第77-79页 |
| 3.2.4 MYB30蛋白与ANNEXINs启动子结合 | 第79-82页 |
| 3.3 ANNEXINs介导MYB30对氧化胁迫响应的调控 | 第82-89页 |
| 3.3.1 突变体myb30 annexin的鉴定 | 第82-83页 |
| 3.3.2 H_2O_2刺激下myb30 annexin双突变体钙表型的观察 | 第83-84页 |
| 3.3.3 突变体myb30氧化胁迫敏感表型的观察 | 第84-85页 |
| 3.3.4 氧化胁迫下MYB30基因表达的变化 | 第85页 |
| 3.3.5 突变体myb30 annexin氧化胁迫敏感表型的观察 | 第85-87页 |
| 3.3.6 ANNEXIN1和ANNEXIN4都参与了氧化胁迫响应的调控过程 | 第87-88页 |
| 3.3.7 MYB30对氧化胁迫响应的调控在幼苗生长的早期发挥作用 | 第88-89页 |
| 3.4 ANNEXINs介导MYB30对热胁迫响应的调控 | 第89-94页 |
| 3.4.1 热胁迫下myb30突变体钙表型的观察 | 第89-90页 |
| 3.4.2 热胁迫下myb30 annexin双突变体钙表型的观察 | 第90-91页 |
| 3.4.3 突变体myb30热胁迫敏感表型的观察 | 第91-92页 |
| 3.4.4 热胁迫下MYB30基因的表达下调 | 第92页 |
| 3.4.5 突变体myb30 annexin热胁迫敏感表型的观察 | 第92-94页 |
| 3.4.6 ANNEXIN1和ANNEXIN4都参与了热胁迫响应调控过程 | 第94页 |
| 3.5 钙离子通道抑制剂LaCl_3对myb30-2突变体表型影响的观察 | 第94-99页 |
| 3.5.1 LaCl_3处理下myb30-2突变体H_2O_2或热胁迫诱导钙表型的观察 | 第94-95页 |
| 3.5.2 LaCl_3处理下myb30-2突变体氧化胁迫敏感表型的观察 | 第95-96页 |
| 3.5.3 LaCl_3处理下myb30-2突变体热胁迫敏感表型的观察 | 第96-98页 |
| 3.5.4 EGTA处理下myb30-2突变体氧化胁迫敏感表型的观察 | 第98-99页 |
| 3.6 不同胁迫下钙信号形成的特异性研究 | 第99-101页 |
| 3.6.1 ANNEXINs参与不同胁迫下myb30中钙信号形成的特异性研究 | 第99-100页 |
| 3.6.2 突变体myb30-2异常的钙信号不一定影响下游胁迫响应 | 第100-101页 |
| 3.7 MYB30通过钙信号参与胁迫响应的特异性的研究 | 第101-105页 |
| 3.7.1 MYB30通过钙信号调控渗透胁迫响应 | 第101-102页 |
| 3.7.2 MYB30对ABA信号通路的调控不通过钙信号 | 第102-104页 |
| 3.7.3 MYB30对ABA信号通路的调控不通过ANNEXINs | 第104-105页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第105-110页 |
| 4.1 分析与讨论 | 第105-109页 |
| 4.1.1 ANNEXINs介导的钙信号的产生具有特异性 | 第106页 |
| 4.1.2 钙离子外排组件可能没有参与MYB30对胞内钙信号的影响过程 | 第106-107页 |
| 4.1.3 盐胁迫下myb30钙信号的异常不影响其盐胁迫响应 | 第107页 |
| 4.1.4 MYB30介导的拟南芥ABA响应不通过钙信号 | 第107-108页 |
| 4.1.5 MYB30在氧化胁迫和热胁迫响应中的功能 | 第108页 |
| 4.1.6 氧化胁迫和热胁迫对MYB30表达的影响 | 第108页 |
| 4.1.7 MYB30对氧化胁迫和热胁迫响应的调控只部分通过ANNEXINs | 第108-109页 |
| 4.1.8 MYB30对其它胁迫响应的调控可能不通过ANNEXINs | 第109页 |
| 4.2 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-126页 |
| 致谢 | 第126-129页 |
| 个人简历 | 第129页 |
