| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 术语和缩略语表 | 第20-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-36页 |
| 1.1 重金属污染对环境的影响 | 第21-24页 |
| 1.1.1 重金属污染对土壤的影响 | 第21-22页 |
| 1.1.2 重金属污染对水环境的影响 | 第22-23页 |
| 1.1.3 重金属污染对大气环境的影响 | 第23页 |
| 1.1.4 重金属污染对人体的影响 | 第23页 |
| 1.1.5 重金属污染对生物的影响 | 第23-24页 |
| 1.2 重金属快速检测技术研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.1 生物化学传感器法 | 第25页 |
| 1.2.2 快速试纸检测法 | 第25页 |
| 1.2.3 指示生物法 | 第25-26页 |
| 1.2.4 酶分析法 | 第26页 |
| 1.3 重金属人工抗原的制备 | 第26-29页 |
| 1.3.1 重金属人工抗原合成原理 | 第26-27页 |
| 1.3.2 重金属中间化合物的选择 | 第27页 |
| 1.3.3 人工抗原载体的选择 | 第27页 |
| 1.3.4 半抗原与载体蛋白偶联技术 | 第27-29页 |
| 1.3.4.1 重氮化法 | 第28页 |
| 1.3.4.2 戊二醛法 | 第28页 |
| 1.3.4.3 混合酸酐法 | 第28-29页 |
| 1.3.4.4 碳二亚胺法 | 第29页 |
| 1.3.4.5 活泼酯法 | 第29页 |
| 1.4 重金属免疫学检测方法研究进展 | 第29-33页 |
| 1.4.1 免疫分析法原理 | 第29-30页 |
| 1.4.2 重金属免疫检测技术研究进展 | 第30-31页 |
| 1.4.3 重金属免疫检测技术 | 第31-33页 |
| 1.4.3.1 重金属间接竞争ELISA免疫检测法 | 第31-32页 |
| 1.4.3.2 一步竞争性重金属免疫检测法 | 第32页 |
| 1.4.3.3 重金属KinExA免疫检测方法 | 第32-33页 |
| 1.4.3.4 荧光偏振重金属免疫检测 | 第33页 |
| 1.5 研究背景及意义 | 第33-34页 |
| 1.6 研究内容及技术路线 | 第34-36页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第34-35页 |
| 1.5.1.1 设计合成重金属汞、铜、铅、镉人工抗原 | 第34页 |
| 1.5.1.2 对合成的重金属人工抗原进行表征鉴定 | 第34页 |
| 1.5.1.3 免疫动物，获得重金属相关抗体 | 第34-35页 |
| 1.5.1.4 研究建立四种重金属间接ELISA分析方法 | 第35页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 以青霉素G钠盐和谷胱甘肽为中间化合物合成汞的半抗原、人工抗原 | 第36-57页 |
| 2.1 引言 | 第36页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第36-40页 |
| 2.2.1 实验主要试剂 | 第36-39页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.3.1 汞半抗原的制备与表征 | 第40-41页 |
| 2.3.1.1 以青霉素G钠盐作为中间化合物合成汞半抗原 | 第40-41页 |
| 2.3.1.2 谷胱甘肽（GSH）合成汞半抗原 | 第41页 |
| 2.3.2 汞人工抗原的制备 | 第41-43页 |
| 2.3.2.1 以半抗原青霉烯酸硫醇汞盐合成人工抗原 | 第42页 |
| 2.3.2.2 以半抗原（Hg-GSH）合成人工抗原 | 第42-43页 |
| 2.3.3 汞人工抗原的表征与鉴定 | 第43-46页 |
| 2.3.3.1 人工抗原的结构表征 | 第43-45页 |
| （1）紫外分光光度法 | 第43页 |
| （2）红外吸收光谱法 | 第43页 |
| （3）圆二色谱法 | 第43页 |
| （4）聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第43-44页 |
| （5）测定人工抗原中的ε-氨基替换率 | 第44-45页 |
| 2.3.3.2 人工抗原蛋白含量和偶联比测定 | 第45-46页 |
| （1）蛋白含量测定 | 第45页 |
| （2）人工抗原中重金属汞含量测定 | 第45-46页 |
| （3）人工抗原偶联比统计分析 | 第46页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第46-56页 |
| 2.4.1 汞半抗原（Hg-MPA）的表征 | 第46-49页 |
| 2.4.1.1 紫外光谱 | 第46-47页 |
| 2.4.1.2 红外光谱 | 第47-49页 |
| 2.4.2 人工抗原的表征与鉴定 | 第49-52页 |
| 2.4.2.1 紫外光谱 | 第49-50页 |
| 2.4.2.2 圆二色谱 | 第50页 |
| 2.4.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第50-51页 |
| 2.4.2.4 三硝基苯磺酸钠法测定抗原中ε-氨基含量 | 第51-52页 |
| 2.4.3 人工抗原中蛋白含量和偶联比 | 第52-56页 |
| 2.4.3.1 人工抗原中重金属Hg2+含量测定 | 第52页 |
| 2.4.3.2 人工抗原蛋白质浓度测定 | 第52-53页 |
| 2.4.3.3 重金属汞与载体蛋白偶联比计算 | 第53-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 抗汞多克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫吸附法（IC-ELISA）确立 | 第57-78页 |
| 3.1 实验试剂和仪器 | 第57-60页 |
| 3.1.1 实验主要试剂 | 第57-59页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第59-60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-65页 |
| 3.2.1 实验动物与饲养 | 第60页 |
| 3.2.2 阴性对照血清制备 | 第60-61页 |
| 3.2.3 免疫抗原预处理（乳化） | 第61页 |
| 3.2.4 免疫与血清采集方案 | 第61页 |
| 3.2.5 采血与抗血清制备 | 第61-62页 |
| 3.2.6 抗血清效价测定 | 第62-63页 |
| 3.2.7 IC-ELISA方法的优化 | 第63-64页 |
| 3.2.7.1 最佳包被抗原-抗体反应浓度确定 | 第63页 |
| 3.2.7.2 包被抗原包被条件确定 | 第63页 |
| 3.2.7.3 最佳包被缓冲液 | 第63页 |
| 3.2.7.4 封闭剂的选择 | 第63-64页 |
| 3.2.7.5 山羊抗兔IgG-HRP（二抗）工作浓度的确定 | 第64页 |
| 3.2.8 测定重金属汞IC-ELISA方法的确立 | 第64页 |
| 3.2.9 方法的准确性和特异性 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与分析 | 第65-76页 |
| 3.3.1 抗体的获得及效价测定 | 第65-67页 |
| 3.3.2 IC-ELISA方法条件优化 | 第67-72页 |
| 3.3.2.1 抗原抗体最适反应浓度的确定 | 第67-69页 |
| 3.3.2.2 最佳包被缓冲液 | 第69-70页 |
| 3.3.2.3 封闭剂的选择及使用浓度优化 | 第70-71页 |
| 3.3.2.4 山羊抗兔IgG-HRP工作浓度的确定 | 第71-72页 |
| 3.3.3 测定重金属汞IC-ELISA方法的建立 | 第72-74页 |
| 3.3.3.1 操作步骤 | 第72-73页 |
| 3.3.3.2 IC-ELISA方法检测汞的标准曲线 | 第73-74页 |
| 3.3.4 方法的准确性和特异性 | 第74-76页 |
| 3.3.4.1 加标回收率 | 第74-75页 |
| 3.3.4.2 交叉反应试验 | 第75-76页 |
| 3.4 小结 | 第76-78页 |
| 第四章 铜人工抗原制备及其IC-ELISA检测方法研究 | 第78-100页 |
| 4.1 引言 | 第78页 |
| 4.2 材料与方法 | 第78-85页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第78页 |
| 4.2.1.1 试剂 | 第78页 |
| 4.2.1.2 仪器 | 第78页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第78-85页 |
| 4.2.2.1 重金属铜人工抗原合成 | 第78-80页 |
| 4.2.2.2 铜人工抗原的表征与鉴定 | 第80-81页 |
| （1）紫外光谱 | 第80-81页 |
| （2）红外光谱法 | 第81页 |
| （3）圆二色谱法 | 第81页 |
| （4）三硝基苯磺酸钠法测定抗原中ε-氨基含量 | 第81页 |
| （5）人工抗原中Cu与载体蛋白偶联比统计分析 | 第81页 |
| 4.2.2.3 重金属铜人工抗原制备多克隆抗体 | 第81-82页 |
| 4.2.2.4 抗血清效价的测定 | 第82页 |
| 4.2.2.5 IC-ELISA方法条件的优化 | 第82-83页 |
| （1）抗原-抗体工作浓度 | 第82-83页 |
| （2）包被缓冲液筛选 | 第83页 |
| （3）封闭剂筛选与浓度确定 | 第83页 |
| （4）最佳二抗工作浓度 | 第83页 |
| 4.2.2.6 间接竞争ELISA法测定重金属铜方法的确立 | 第83-84页 |
| 4.2.2.7 添加和回收试验及与ICP-AES检测方法的比较 | 第84页 |
| 4.2.2.8 交叉反应试验 | 第84-85页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第85-99页 |
| 4.3.1 铜人工抗原的合成与鉴定 | 第85-90页 |
| 4.3.1.1 紫外光谱 | 第85-86页 |
| 4.3.1.2 红外光谱法 | 第86-88页 |
| 4.3.1.3 圆二色谱 | 第88-89页 |
| 4.3.1.4 TNBS法测定铜人工抗原中ε-氨基替换率 | 第89-90页 |
| 4.3.1.5 偶联比统计 | 第90页 |
| 4.3.2 铜抗血清的效价测定 | 第90-92页 |
| 4.3.3 IC-ELISA方法中主要影响因素的优化 | 第92-96页 |
| 4.3.3.1 最佳抗原-抗体工作浓度 | 第92页 |
| 4.3.3.2 最佳包被缓冲液 | 第92-93页 |
| 4.3.3.3 封闭剂和封闭剂浓度选择 | 第93-95页 |
| 4.3.3.4 最佳二抗工作浓度 | 第95-96页 |
| 4.3.4 测定铜IC-ELISA方法的确立 | 第96-97页 |
| 4.3.4.1 操作步骤 | 第96页 |
| 4.3.4.2 标准曲线的绘制 | 第96-97页 |
| 4.3.5 加标回收率试验与ICP-AES检测方法比较 | 第97-98页 |
| 4.3.6 交叉反应性 | 第98-99页 |
| 4.4 小结 | 第99-100页 |
| 第五章 基于p-NH2-Bn-DTPA双功能螯合剂的铅和镉人工抗原合成及其IC-ELISA检测方法研究 | 第100-130页 |
| 5.1 引言 | 第100页 |
| 5.2 实验试剂和仪器 | 第100-104页 |
| 5.2.1 实验主要试剂 | 第100-102页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第102-103页 |
| 5.2.3 实验动物 | 第103-104页 |
| 5.3 实验方法 | 第104-110页 |
| 5.3.1 铅人工抗原合成 | 第104-105页 |
| 5.3.1.1 人工抗原（Pb-p-NH2-Bn-DTPA-KLH）合成步骤 | 第104-105页 |
| （1）反应溶液配制 | 第104-105页 |
| （2）操作步骤 | 第105页 |
| 5.3.1.2 铅包被抗原（Pb-p-NH2-Bn-DTPA-KLH）的合成 | 第105页 |
| 5.3.2 镉人工抗原合成 | 第105-106页 |
| 5.3.3 铅和镉人工抗原的表征与鉴定 | 第106-107页 |
| 5.3.3.1 紫外光谱 | 第106页 |
| 5.3.3.2 圆二色谱 | 第106页 |
| 5.3.3.3 抗原的SDS-PAGE | 第106页 |
| 5.3.3.4 TNBS法测定抗原中ε-氨基含量 | 第106页 |
| 5.3.3.5 抗原偶联比的测定 | 第106-107页 |
| 5.3.4 铅和镉特异性多克隆抗体的制备 | 第107-108页 |
| 5.3.5 抗血清效价的测定 | 第108-109页 |
| 5.3.6 ELISA方法优化 | 第109页 |
| 5.3.7 测定铅IC-ELISA方法的确立 | 第109页 |
| 5.3.8 测定镉IC-ELISA方法的确立 | 第109页 |
| 5.3.9 方法的准确性和特异性 | 第109-110页 |
| 5.4 结果与分析 | 第110-128页 |
| 5.4.1 人工抗原的合成与鉴定 | 第110-117页 |
| 5.4.1.1 紫外光谱 | 第110-112页 |
| 5.4.1.2 圆二色谱 | 第112-113页 |
| 5.4.1.3 铅和镉人工抗原的SDS-PAGE | 第113-115页 |
| 5.4.1.4 人工抗原中ε-氨基含量 | 第115页 |
| 5.4.1.5 偶联比的测定 | 第115-117页 |
| 5.4.2 抗体的获得及效价测定 | 第117-119页 |
| 5.4.3 重金属铅和镉IC-ELISA方法的优化 | 第119-123页 |
| 5.4.3.1 抗原抗体最适反应浓度的确定 | 第119-121页 |
| 5.4.3.2 最佳包被缓冲液确定 | 第121页 |
| 5.4.3.3 封闭液的选择及优化使用浓度 | 第121-122页 |
| 5.4.3.4 二抗工作浓度的确定 | 第122-123页 |
| 5.4.4 重金属铅的IC-ELISA测定方法建立 | 第123-124页 |
| 5.4.4.1 操作步骤 | 第123页 |
| 5.4.4.2 IC-ELISA检测铅的标准曲线 | 第123-124页 |
| 5.4.5 重金属铅IC-ELISA检测方法的准确性和特异性 | 第124-125页 |
| 5.4.6 重金属镉的IC-ELISA方法建立 | 第125-126页 |
| 5.4.6.1 操作步骤 | 第125-126页 |
| 5.4.6.2 IC-ELISA检测镉的标准曲线 | 第126页 |
| 5.4.7 重金属镉IC-ELISA检测方法的准确性和特异性 | 第126-128页 |
| 5.5 小结 | 第128-130页 |
| 第六章 总结与展望 | 第130-134页 |
| 6.1 总结 | 第130-132页 |
| 6.2 创新点 | 第132-133页 |
| 6.3 展望 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 攻读学位期间发表的论文及所获专利 | 第149-152页 |
