| 致谢 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征及其病毒研究进展 | 第11-17页 |
| 1.1.1 PRRSV病原学 | 第11-13页 |
| 1.1.1.1 PRRSV的分类地位及生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.1.2 PRRSV的细胞嗜性 | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 PRRSV基因组结构 | 第13页 |
| 1.1.2 PRRSV编码蛋白的结构和功能 | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 非结构蛋白 | 第14页 |
| 1.1.2.2 结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.1.3 PRRSV流行病学 | 第15-16页 |
| 1.1.4 PRRSV的遗传变异 | 第16页 |
| 1.1.5 临床症状及致病机理 | 第16-17页 |
| 1.1.6 防控策略 | 第17页 |
| 1.2 PRRSV反向遗传学研究进展 | 第17-20页 |
| 1.2.1 PRRSV反向遗传学概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 PRRSV感染性cDNA克隆的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.2.1 蛋白功能的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 在研究新型疫苗和基因载体的上的应用 | 第19-20页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒HNyc15株的分离与鉴定 | 第20-28页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1.1 血清及病毒样品 | 第20页 |
| 2.2.1.2 细胞 | 第20页 |
| 2.2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.1.4 培养基与主要溶液的配制 | 第21页 |
| 2.2.1.5 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.2.1 PCR引物的设计 | 第21-22页 |
| 2.2.2.2 样品的准备 | 第22页 |
| 2.2.2.3 提取核酸 | 第22页 |
| 2.2.2.4 反转录 | 第22-23页 |
| 2.2.2.5 血清样品PCR检测 | 第23页 |
| 2.2.2.6 PRRSV的分离与培养 | 第23页 |
| 2.2.2.7 细胞培养物的Nsp2基因序列扩增、克隆与测序及比对分析 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.3.1 血清样品的PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.3.2 PRRSV的分离 | 第25-26页 |
| 2.3.3 Nsp2基因序列的拼接及氨基酸同源性分析 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒HNyc15株全基因序列测定与分析 | 第28-36页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 材料和方法 | 第28-32页 |
| 3.2.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.2.1.1 病毒样品 | 第28页 |
| 3.2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 3.2.1.3 主要设备 | 第28-29页 |
| 3.2.1.4 主要溶液配制 | 第29页 |
| 3.2.2 方法 | 第29-32页 |
| 3.2.2.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 3.2.2.2 提取核酸及反转录 | 第30页 |
| 3.2.2.3 全基因扩增、克隆与测序与序列拼接 | 第30-31页 |
| 3.2.2.4 全基因序列同源性分析 | 第31页 |
| 3.2.2.5 全基因序列遗传进化分析 | 第31页 |
| 3.2.2.6 序列重组分析 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 PRRSV全基因组扩增、克隆、测序与序列拼接 | 第32-33页 |
| 3.3.2 HNyc15毒株全基因序列同源性分析 | 第33页 |
| 3.3.3 HNyc15株全基因序列遗传进化分析 | 第33-34页 |
| 3.3.4 HNyc15毒株基因重组分析 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒HNyc15株感染性克隆的构建及鉴定 | 第36-54页 |
| 4.1 引言 | 第36页 |
| 4.2 材料与方法 | 第36-49页 |
| 4.2.1 材料 | 第36-37页 |
| 4.2.1.1 病毒和细胞 | 第36页 |
| 4.2.1.2 载体和菌株 | 第36页 |
| 4.2.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 4.2.1.4 细胞培养基及主要溶液配制 | 第37页 |
| 4.2.1.5 主要仪器设备 | 第37页 |
| 4.2.2 方法 | 第37-49页 |
| 4.2.2.1 构建策略 | 第37-38页 |
| 4.2.2.2 引物设计与合成 | 第38-39页 |
| 4.2.2.3 pBluescriptⅡSK(+)载体改造 | 第39-41页 |
| 4.2.2.4 PRRSV HNyc15株基因组片段的扩增 | 第41页 |
| 4.2.2.5 HNyc15各个片段的克隆和中间质粒的构建 | 第41-42页 |
| 4.2.2.6 HNyc15全长质粒的拼接与测序 | 第42-47页 |
| 4.2.2.7 病毒的拯救 | 第47页 |
| 4.2.2.8 拯救病毒的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.2.2.9 拯救病毒生物学分析 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.3.1 pBluescriptⅡSK(+)载体改造 | 第49页 |
| 4.3.2 HNyc15株各片段RT-PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| 4.3.3 HNyc15株全长cDNA质粒的拼接与测序 | 第50-51页 |
| 4.3.4 病毒拯救 | 第51页 |
| 4.3.5 PRRSV HNyc15株感染性克隆的鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3.5.1 拯救病毒的IPMA鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3.5.2 拯救病毒的遗传标记鉴定 | 第52页 |
| 4.3.6 PRRSV HNyc15株拯救病毒的生物学特性 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| Abstract | 第62-63页 |
