| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 流感病毒 | 第11-12页 |
| 1.1.1 引言 | 第11页 |
| 1.1.2 流感病毒大流行 | 第11-12页 |
| 1.2 流感病毒核糖核蛋白 | 第12-14页 |
| 1.2.1 vRNP向细胞核转运 | 第12-13页 |
| 1.2.2 子代vRNP的产生和组装 | 第13页 |
| 1.2.3 核糖核蛋白的细胞核输出 | 第13页 |
| 1.2.4 核糖核蛋白的细胞质运输 | 第13-14页 |
| 1.3 PIAS | 第14-17页 |
| 1.3.1 SUMO修饰系统 | 第14页 |
| 1.3.2 PIAS蛋白结构域 | 第14-15页 |
| 1.3.3 PIAS蛋白SUMO E3连接酶功能 | 第15-16页 |
| 1.3.4 PIAS1转录调节功能 | 第16-17页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 筛选和鉴定与NP蛋白相互作用的宿主因子 | 第19-26页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 病毒、菌株和细胞系 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂和软件 | 第19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 引物 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 酵母双杂交 | 第19-20页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第20-21页 |
| 2.2.3 免疫共沉淀 | 第21页 |
| 2.2.4 GST-pull down | 第21页 |
| 2.2.5 激光共聚焦 | 第21页 |
| 2.3 结果 | 第21-25页 |
| 2.3.1 酵母双杂交回交验证和自激活检测 | 第21-22页 |
| 2.3.2 免疫共沉淀验证PIAS1蛋白与NP蛋白相互作用 | 第22-24页 |
| 2.3.3 GST-pull down验证PIAS1与NP相互作用 | 第24页 |
| 2.3.4 激光共聚焦检测PIAS1与NP共定位 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 宿主蛋白PIAS1调控流感病毒复制及聚合酶的活性 | 第26-38页 |
| 3.1 材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 病毒、菌株和细胞系 | 第26页 |
| 3.1.2 引物 | 第26-27页 |
| 3.1.3 实验试剂和软件 | 第27页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第27页 |
| 3.2 方法 | 第27-29页 |
| 3.2.1 RNA干扰 | 第27页 |
| 3.2.2 过表达细胞系构建 | 第27页 |
| 3.2.3 病毒含量滴定 | 第27页 |
| 3.2.4 病毒生长测定 | 第27-28页 |
| 3.2.5 Q-PCR | 第28页 |
| 3.2.6 双荧光素酶报告基因 | 第28-29页 |
| 3.2.7 免疫共沉淀 | 第29页 |
| 3.3 结果 | 第29-36页 |
| 3.3.1 siRNA干扰PIAS1对流感病毒复制影响 | 第29页 |
| 3.3.2 过表达PIAS1对流感病毒复制影响 | 第29-30页 |
| 3.3.3 siRNA干扰检测病毒RNA结果 | 第30-31页 |
| 3.3.4 siRNA干扰检测病毒蛋白表达变化 | 第31页 |
| 3.3.5 PIAS1对聚合酶活性的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.6 免疫共沉淀验证PIAS1与聚合酶蛋白相互作用 | 第32-33页 |
| 3.3.7 鉴定PIAS1与PB1、PB2和NP相互作用结构域 | 第33-34页 |
| 3.3.8 PIAS1对聚合酶组装的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.9 PIAS1苏素连接酶活性对聚合酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章A型流感病毒感染调控JAK/STAT1信号通路 | 第38-43页 |
| 4.1 材料 | 第38页 |
| 4.1.1 病毒、菌株和细胞系 | 第38页 |
| 4.1.2 实验试剂和软件 | 第38页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第38页 |
| 4.1.4 引物 | 第38页 |
| 4.2 方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 4.2.2 病毒感染与刺激 | 第39页 |
| 4.2.3 Q-PCR | 第39页 |
| 4.3 结果 | 第39-42页 |
| 4.3.1 流感病毒感染刺激PIAS1表达 | 第39-40页 |
| 4.3.2 流感病毒感染抑制PIAS1与STAT1相互作用 | 第40页 |
| 4.3.3 流感病毒感染促进JAK/STAT1信号通路IFN-β诱导基因的表达 | 第40-41页 |
| 4.3.4 过表达PIAS1抑制JAK/STAT1信号通路PIAS1敏感基因表达 | 第41-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
