| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌生长模式 | 第14页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫机理 | 第14-15页 |
| 1.2 几丁质及昆虫围食膜的概述 | 第15-16页 |
| 1.2.1 几丁质 | 第15-16页 |
| 1.2.2 围食膜 | 第16页 |
| 1.3 几丁质结合蛋白 | 第16-18页 |
| 1.3.1 CBP的分布及结构特点 | 第16-17页 |
| 1.3.2 CBP的功能特性 | 第17页 |
| 1.3.3 苏云金芽胞杆菌中的CBP | 第17-18页 |
| 1.4 生物信息学数据库 | 第18-19页 |
| 1.4.1 美国国立生物技术中心（NCBI） | 第18页 |
| 1.4.2 Protparam tool of ExPaSY | 第18-19页 |
| 1.4.3 SignalP4.1 | 第19页 |
| 1.4.4 TMHMM Server v. 2.0 | 第19页 |
| 1.4.5 PSORTb 3.0 tool of ExPaSY | 第19页 |
| 1.4.6 蛋白结构预测数据库及分析 | 第19页 |
| 1.5 立题依据和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基和抗生素 | 第21-22页 |
| 2.1.3 生化试剂和溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.4 引物 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及热激转化 | 第29页 |
| 2.2.3 苏云金芽胞杆菌感受态细胞的制备与电激转化 | 第29-30页 |
| 2.2.4 突变株的筛选和鉴定 | 第30页 |
| 2.2.5 工程菌株阳性克隆的筛选、鉴定和保存 | 第30-31页 |
| 2.2.6 激光共聚焦显微镜观察蛋白的表达、定位 | 第31页 |
| 2.2.7 碱诱导对基因转录的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR两步法检测 | 第32-34页 |
| 2.2.9 突变体特性研究 | 第34-36页 |
| 第3章 结果与分析 | 第36-58页 |
| 3.1 几丁质结合蛋白生物信息分析 | 第36-44页 |
| 3.1.1 CBP-3189生物信息分析 | 第36-40页 |
| 3.1.2 CBP-3152生物信息分析 | 第40-44页 |
| 3.2 激光共聚焦观察CBP-3189蛋白的表达和定位 | 第44-45页 |
| 3.3 碱诱导对3189基因转录的影响情况分析 | 第45-48页 |
| 3.3.1 激光共聚焦显微镜观察结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR分析 | 第46-48页 |
| 3.4 HD73_3152突变株的构建和筛选 | 第48-51页 |
| 3.4.1 重叠PCR扩增同源突变盒片段 | 第48-49页 |
| 3.4.2 工程菌株的构建、筛选及鉴定结果 | 第49-51页 |
| 3.5 HD73_3189插入型突变株的构建和筛选 | 第51-56页 |
| 3.5.1 重叠PCR扩增同源突变盒片段 | 第51-52页 |
| 3.5.2 工程菌株的构建、筛选及鉴定结果 | 第52-56页 |
| 3.6 突变体的特性研究 | 第56-58页 |
| 3.6.1 突变体的生长曲线测定 | 第56页 |
| 3.6.2 突变株HD73(?3189)围食膜结合性分析 | 第56-58页 |
| 第4章 讨论 | 第58-59页 |
| 第5章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-80页 |
| 附录一：3152基因序列 | 第67页 |
| 附录二：3152突变盒序列 3152u-K-3152d | 第67-68页 |
| 附录三：pRN5101Ω3152质粒测序比对结果 | 第68-73页 |
| 附录四：3189基因序列 | 第73页 |
| 附录五：3189突变盒序列 3189u-K-3189d | 第73-75页 |
| 附录六：pRN5101Ω3189质粒测序比对结果 | 第75-80页 |
| 攻读学位期间发表的论文与研究成果清单 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
