| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1. MDM2的结构与生物学功能 | 第11-12页 |
| 2. MDM2的调控底物 | 第12-15页 |
| 2.1 MDM2依赖p53的调控 | 第12-13页 |
| 2.2 MDM2不依赖p53的调控功能 | 第13-15页 |
| 3. MDM2致癌性的调控机制 | 第15-17页 |
| 3.1 基因水平的调控 | 第15页 |
| 3.2 转录水平的调控机制 | 第15页 |
| 3.3 翻译后修饰的调控机制 | 第15-16页 |
| 3.4 与MDM2相关联的信号转导途径 | 第16-17页 |
| 4. MDM2与恶性肿瘤及其治愈 | 第17-20页 |
| 4.1 MDM2与恶性肿瘤 | 第17-18页 |
| 4.2 MDM2的靶向治疗 | 第18-20页 |
| 5 本实验的创新点 | 第20-21页 |
| 第2章 人体MDM2蛋白的生物制备 | 第21-40页 |
| 1 引言 | 第21页 |
| 2 材料和仪器 | 第21-24页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2 质粒构建所用材料及试剂 | 第22页 |
| 2.3 亲和层析所用材料及试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 培养基成分 | 第23页 |
| 2.5 仪器 | 第23-24页 |
| 2.6 溶液及缓冲体系 | 第24页 |
| 3 方法 | 第24-31页 |
| 3.1 T载体质粒构建 | 第24-26页 |
| 3.2 ppSUMO载体质粒构建 | 第26-27页 |
| 3.3 诱导表达 | 第27-28页 |
| 3.4 细胞收集与破碎 | 第28页 |
| 3.5 融合ppSUMO-MDM2蛋白的亲和纯化及优化 | 第28-29页 |
| 3.6 ULP1酶切实验 | 第29页 |
| 3.7 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第29-30页 |
| 3.8 酶切蛋白浓缩及保存 | 第30页 |
| 3.9 MDM2突变基因的合成 | 第30-31页 |
| 4 结果 | 第31-38页 |
| 4.1 质粒ppSUMO-MDM2的克隆、鉴定 | 第31-32页 |
| 4.2 SUMO-MDM2融合蛋白的诱导表达 | 第32-34页 |
| 4.3 SUMO-MDM2蛋白的药瓶诱导和亲和纯化 | 第34-35页 |
| 4.4 MDM2蛋白的酶切 | 第35-36页 |
| 4.5 MDM2蛋白回收的测定与分析 | 第36-37页 |
| 4.6 MDM2蛋白的突变表达 | 第37-38页 |
| 5. 小结 | 第38-40页 |
| 5.1 讨论 | 第38页 |
| 5.2 结论 | 第38-40页 |
| 第3章 人体MDM2 CTD重组蛋白的生物制备 | 第40-68页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 材料和仪器 | 第40-42页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第40页 |
| 2.2 质粒构建所用材料及试剂 | 第40页 |
| 2.3 亲和层析所用材料及试剂 | 第40-41页 |
| 2.4 蛋白纯化所用材料及试剂 | 第41页 |
| 2.5 溶液及缓冲体系 | 第41页 |
| 2.6 蛋白纯化仪器 | 第41-42页 |
| 3 方法 | 第42-48页 |
| 3.1 质粒构建 | 第42-43页 |
| 3.2 质粒构建鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 诱导表达 | 第44页 |
| 3.4 细胞收集与破碎 | 第44页 |
| 3.5 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第44页 |
| 3.6 融合SUMO-CTD蛋白的亲和纯化及优化 | 第44-45页 |
| 3.7 ULP1酶切实验 | 第45-46页 |
| 3.8 离子交换层析 | 第46页 |
| 3.9 蛋白溶液中DNA/RNA的鉴定与去除 | 第46页 |
| 3.10 蛋白沉淀实验 | 第46-48页 |
| 3.11 分子筛层析 | 第48页 |
| 4 结果 | 第48-66页 |
| 4.1 质粒ppSUMO-CTD的克隆、鉴定 | 第48-50页 |
| 4.2 SUMO-CTD融合蛋白的诱导表达 | 第50-53页 |
| 4.3 SUMO-CTD融合蛋白的亲和纯化 | 第53-55页 |
| 4.4 ULP1酶切实验 | 第55-57页 |
| 4.5 离子交换纯化CTD蛋白 | 第57-60页 |
| 4.6 DNA的检测与去除 | 第60-61页 |
| 4.7 CTD蛋白沉淀实验 | 第61-62页 |
| 4.8 CTD蛋白的分子筛纯化 | 第62-63页 |
| 4.9 分子筛对CTD蛋白的纯化和鉴定 | 第63-66页 |
| 5. 小结 | 第66-68页 |
| 5.1 讨论 | 第66页 |
| 5.2 结论 | 第66-68页 |
| 第4章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 1 结论 | 第68-69页 |
| 2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 发表文章 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |