| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第12-24页 |
| 1.1 我国苹果栽培现状 | 第12-13页 |
| 1.1.1 苹果病毒病的研究现状 | 第12页 |
| 1.1.2 三种潜隐性病毒的危害 | 第12-13页 |
| 1.1.2.1 对树体的危害 | 第12-13页 |
| 1.1.2.2 对果实的影响 | 第13页 |
| 1.2 三种苹果潜隐性病毒的分子生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.2.1 基因组特征 | 第13-14页 |
| 1.2.2 外壳蛋白 | 第14页 |
| 1.3 植物病毒检测方法 | 第14-17页 |
| 1.3.1 指示植物法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 扫描电镜技术 | 第15页 |
| 1.3.3 血清学方法 | 第15-16页 |
| 1.3.4 分子生物学技术 | 第16-17页 |
| 1.3.4.1 核酸杂交技术 | 第16页 |
| 1.3.4.2 双链RNA分析技术 | 第16页 |
| 1.3.4.3 聚合酶链式反应 | 第16-17页 |
| 1.4 果树的无病毒栽培 | 第17-20页 |
| 1.4.1 植物病毒的传播途径 | 第17-18页 |
| 1.4.1.1 树体之间的传播 | 第17页 |
| 1.4.1.2 在植物体内的传播 | 第17-18页 |
| 1.4.2 植物脱毒技术 | 第18-20页 |
| 1.4.2.1 茎尖培养 | 第18-19页 |
| 1.4.2.2 高温处理 | 第19页 |
| 1.4.2.3 高温处理结合茎尖培养 | 第19页 |
| 1.4.2.4 抗病毒药剂处理 | 第19页 |
| 1.4.2.5 超低温处理 | 第19-20页 |
| 1.4.2.6 微体嫁接 | 第20页 |
| 1.5 木本植物不定根形成机理的研究 | 第20-22页 |
| 1.5.1 离体再生研究 | 第21页 |
| 1.5.2 不定根的形成机理 | 第21-22页 |
| 1.5.2.1 不定根形成的解剖学特征 | 第21页 |
| 1.5.2.2 生长素与不定根的形成 | 第21-22页 |
| 1.5.2.3 不定根形成的基因调控 | 第22页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 三种苹果潜隐性病毒多重RT-PCR检测体系的建立 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第24页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.1.1 三种苹果潜隐性病毒的引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.1.2 内参基因的选择与引物设计 | 第25页 |
| 2.3.2 植物总RNA的提取 | 第25-27页 |
| 2.3.2.1 RNA提取液的配置 | 第26页 |
| 2.3.2.2 植物总RNA提取方法 | 第26-27页 |
| 2.3.2.3 RNA纯度检测 | 第27页 |
| 2.3.2.4 RNA完整性检测 | 第27页 |
| 2.3.3 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.3.3.1 去除RNA中DNA | 第27页 |
| 2.3.3.2 RT反应 | 第27-28页 |
| 2.3.4 PCR反应体系的建立 | 第28-29页 |
| 2.3.4.1 内参基因PCR反应体系的建立 | 第28页 |
| 2.3.4.2 每种目的基因单一PCR检测体系的建立 | 第28-29页 |
| 2.3.4.3 双重PCR检测体系的建立 | 第29页 |
| 2.3.4.4 多重PCR检测体系的建立及优化 | 第29页 |
| 2.3.5 ASGV序列克隆及分析 | 第29-34页 |
| 2.3.5.1 ASGV的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.5.2 ASGV片段纯化 | 第31页 |
| 2.3.5.3 ASGV与T-Vector连接 | 第31-32页 |
| 2.3.5.4 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受细胞 | 第32-34页 |
| 2.4 结果分析 | 第34-41页 |
| 2.4.1 植物总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.4.2 多重RT-PCR检测体系的建立与优化 | 第35-41页 |
| 2.4.2.1 单一PCR检测结果 | 第35-37页 |
| 2.4.2.2 双重PCR检测体系的建立 | 第37页 |
| 2.4.2.3 多重PCR检测体系的建立 | 第37-38页 |
| 2.4.2.4 苹果砧木‘M26’-ASGV序列分析 | 第38-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 三种苹果潜隐性病毒脱除技术的研究 | 第43-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第43页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 病毒抑制剂‘利巴韦林’脱毒实验 | 第43-44页 |
| 3.3.1.1 ‘M26’对‘利巴韦林’的敏感实验 | 第43-44页 |
| 3.3.1.2 不同浓度的‘利巴韦林’脱毒实验 | 第44页 |
| 3.3.1.3 ‘利巴韦林’恢复实验 | 第44页 |
| 3.3.2 高温处理结合茎尖培养脱毒 | 第44-45页 |
| 3.3.2.1 高温热处理 | 第44页 |
| 3.3.2.2 茎尖培养 | 第44-45页 |
| 3.4 结果分析 | 第45-50页 |
| 3.4.1 ‘利巴韦林’脱毒 | 第45-47页 |
| 3.4.1.1 ‘利巴韦林’对‘M26’生理状态的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.1.2 ‘利巴韦林’脱毒结果 | 第46页 |
| 3.4.1.3 ‘利巴韦林’恢复实验 | 第46-47页 |
| 3.4.2 高温处理结合茎尖培养脱毒 | 第47-50页 |
| 3.4.2.1 茎尖大小对成活率及脱毒率的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.2.2 高温处理结合二次茎尖培养脱毒 | 第48-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 苹果砧木‘M26’高效离体再生及不定根形成机理研究 | 第52-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第52页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第52页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.3.1 高效再生体系的建立 | 第53-54页 |
| 4.3.1.1 无菌苗的获得 | 第53页 |
| 4.3.1.2 无菌苗的继代培养 | 第53页 |
| 4.3.1.3 外植体的剪切及接种方式 | 第53页 |
| 4.3.1.4 植物生长调节剂诱导不定芽 | 第53-54页 |
| 4.3.2 ‘M26’的‘两步’生根 | 第54-56页 |
| 4.3.2.1 不定根形成相关基因ARRO-1的表达分析 | 第54-55页 |
| 4.3.2.2 ‘两步’生根法诱导‘M26’生根 | 第55页 |
| 4.3.2.3 炼苗与移栽 | 第55-56页 |
| 4.3.3 无病毒苗木的培养 | 第56页 |
| 4.3.3.1 无毒苗的繁殖 | 第56页 |
| 4.3.3.2 无毒苗的生根 | 第56页 |
| 4.4 结果分析 | 第56-67页 |
| 4.4.1 无菌苗的获得 | 第56-57页 |
| 4.4.2 无菌苗的初代培养 | 第57页 |
| 4.4.3 外植体的离体再生 | 第57-60页 |
| 4.4.4 ARRO-1的表达分析 | 第60-61页 |
| 4.4.5 不同浓度的IBA对不定根形成的影响 | 第61页 |
| 4.4.6 不同诱导时间对不定根形成的影响 | 第61-66页 |
| 4.4.7 ‘两步’生根 | 第66-67页 |
| 4.4.8 炼苗移栽 | 第67页 |
| 4.5 讨论 | 第67-69页 |
| 总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
