| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第16-36页 |
| 1.1 松树蜂及其共生菌基本介绍 | 第17-23页 |
| 1.1.1 树蜂科及树蜂属简要介绍 | 第17-19页 |
| 1.1.2 松树蜂的形态特征与生物学特性 | 第19-21页 |
| 1.1.3 树蜂科昆虫共生菌的分类地位 | 第21-22页 |
| 1.1.3.1 松树蜂共生菌的分类地位 | 第21页 |
| 1.1.3.2 树蜂科昆虫共生菌种类概括 | 第21-22页 |
| 1.1.4 松树蜂与共生菌的共生关系研究 | 第22-23页 |
| 1.2 松树蜂共生菌的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2.1 松树蜂共生菌的生物生态学研究 | 第23-24页 |
| 1.2.2 松树蜂共生菌的真菌病理学研究 | 第24-25页 |
| 1.2.3 松树蜂共生菌的种群遗传学 | 第25页 |
| 1.3 松树蜂毒素的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.1 松树蜂毒素对寄主树木的危害 | 第25-26页 |
| 1.3.2 松树蜂毒素的主成分分析及毒理学研究 | 第26-27页 |
| 1.4 松树蜂毒素和共生菌在危害寄主树木时的协同关系 | 第27页 |
| 1.5 白腐真菌研究进展 | 第27-29页 |
| 1.5.1 白腐真菌介绍 | 第27-28页 |
| 1.5.2 白腐真菌的胞外酶系 | 第28页 |
| 1.5.3 白腐真菌对木质素的降解 | 第28-29页 |
| 1.6 真菌漆酶研究进展 | 第29-32页 |
| 1.6.1 漆酶的基本概念和种类 | 第30页 |
| 1.6.2 真菌漆酶的生物学特性及漆酶活力的测定方法 | 第30-32页 |
| 1.6.3 真菌漆酶的分子生物学研究 | 第32页 |
| 1.7 选题的目的、意义及研究内容 | 第32-36页 |
| 1.7.1 选题的目的和意义 | 第32-33页 |
| 1.7.2 研究内容及技术路线图 | 第33-36页 |
| 2 松树蜂共生菌的分离、培养和鉴定 | 第36-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 2.1.1 松树蜂采样地概况 | 第36页 |
| 2.1.2 松树蜂受害株的选择及供试虫源 | 第36页 |
| 2.1.3 松树蜂雌成虫的解剖观察及贮菌囊的分离 | 第36-38页 |
| 2.1.4 共生菌的室内接种培养及菌落形态观察 | 第38页 |
| 2.1.5 共生菌总DNA的提取及PCR反应条件 | 第38页 |
| 2.1.6 电泳检测、克隆和测序 | 第38-39页 |
| 2.1.7 系统发育 | 第39-40页 |
| 2.1.8 不同菌株之间的生长兼容性测试(VCG Test) | 第40-41页 |
| 2.2 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.2.1 受害木的松树蜂羽化情况调查 | 第41-42页 |
| 2.2.2 松树蜂雌虫的解剖观察 | 第42-43页 |
| 2.2.3 共生菌的形态鉴定 | 第43-45页 |
| 2.2.4 共生菌的ITS鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.5 系统发育 | 第46-47页 |
| 2.2.6 不同菌株之间的生长兼容性测试(VCG Test) | 第47-48页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 3 松树蜂共生菌的生物生态学初步研究 | 第50-58页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-52页 |
| 3.1.1 供试菌种的选择 | 第50页 |
| 3.1.2 菌种的保藏方法 | 第50页 |
| 3.1.3 基础培养基配方 | 第50-51页 |
| 3.1.4 不同pH环境对A.areolatum YQL03生物量的影响 | 第51页 |
| 3.1.5 A.areolatum YQL03最适生长温度的测定 | 第51-52页 |
| 3.1.6 不同碳氮比(C/N)对A.areolatum YQL03生物量的影响 | 第52页 |
| 3.1.7 A.areolatum YQL03生长曲线测定 | 第52页 |
| 3.1.8 数据处理和统计方法 | 第52页 |
| 3.2 结果与分析 | 第52-56页 |
| 3.2.1 不同pH环境对A.areolatum YQL03生物量的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.2 A.areolatum YQL03最适生长温度的测定 | 第53-54页 |
| 3.2.3 不同碳氮比(C/N)对A.areolatum YQL03生物量的影响 | 第54-55页 |
| 3.2.4 A areolatum YQL03生长曲线测定 | 第55-56页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 4 松树蜂毒素对共生菌漆酶活力的影响 | 第58-68页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.1.1 供试菌种的选择 | 第59页 |
| 4.1.2 松树蜂毒素溶液的制备 | 第59页 |
| 4.1.3 A.areolatum YQL03漆酶的发酵培养条件 | 第59-60页 |
| 4.1.4 漆酶活力的测定方法 | 第60页 |
| 4.1.5 数据处理和统计方法 | 第60页 |
| 4.2 结果与分析 | 第60-65页 |
| 4.2.1 毒素溶液的漆酶活力测定 | 第60-61页 |
| 4.2.2 毒素对菌株A.areolatum YQL03漆酶活力的影响 | 第61-65页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第65-68页 |
| 5 松树蜂共生菌漆酶基因的克隆及其转录水平研究 | 第68-96页 |
| 5.1 材料与方法 | 第68-80页 |
| 5.1.1 供试菌种的选择 | 第68页 |
| 5.1.2 菌株A.areolatum YQL03培养条件 | 第68页 |
| 5.1.3 实验所需试剂 | 第68-69页 |
| 5.1.4 实验所需培养基及试剂的配制 | 第69页 |
| 5.1.5 主要使用仪器 | 第69页 |
| 5.1.6 引物设计 | 第69-70页 |
| 5.1.7 总RNA的提取 | 第70-71页 |
| 5.1.8 反转录 | 第71-73页 |
| 5.1.8.1 cDNA第一链的合成 | 第71-72页 |
| 5.1.8.2 3'-RACE-ready cDNA模板的合成 | 第72页 |
| 5.1.8.3 5'-RACE-ready cDNA模板的合成 | 第72-73页 |
| 5.1.9 PCR扩增、回收、连接、转化及测序 | 第73-79页 |
| 5.1.9.1 菌株A.areolatum YQL03漆酶基因保守片段的扩增 | 第73-74页 |
| 5.1.9.2 3’-RACEPClU广增 | 第74页 |
| 5.1.9.3 5'-RACE PCR扩增 | 第74-75页 |
| 5.1.9.4 菌株A areolatum YQL03漆酶基因cDNA全长的验证 | 第75-76页 |
| 5.1.9.5 内参基因的PCR扩增 | 第76页 |
| 5.1.9.6 目的基因的PCR扩增 | 第76-77页 |
| 5.1.9.7 DNA片段的回收与纯化 | 第77-78页 |
| 5.1.9.8 目的片段与pMD-18T载体的连接 | 第78页 |
| 5.1.9.9 大肠杆菌的转化(热击法) | 第78-79页 |
| 5.1.9.10 测序 | 第79页 |
| 5.1.10 生物信息学分析 | 第79页 |
| 5.1.11 qRT-PCR分析菌株A.areolatum YQL03漆酶基因的表达水平 | 第79-80页 |
| 5.1.11.1 内参基因标准品的制备及标准曲线的制作 | 第79-80页 |
| 5.1.11.2 内参基因的qRT-PCR扩增 | 第80页 |
| 5.1.11.3 目的基因标准曲线的制作 | 第80页 |
| 5.1.11.4 目的基因的qRT-PCR扩增 | 第80页 |
| 5.2 结果与分析 | 第80-94页 |
| 5.2.1 菌株A.areolatum YQL03RNA的提取 | 第80-82页 |
| 5.2.2 菌株A.areolatum YQL03漆酶基因保守片段的扩增 | 第82页 |
| 5.2.3 漆酶基因的3’和5'RACE PCR及cDNA全长的序列的拼接 | 第82-83页 |
| 5.2.4 漆酶基因cDNA全长的验证及其氨基酸序列推导分析 | 第83-87页 |
| 5.2.5 内参基因的PCR扩增及测序 | 第87-88页 |
| 5.2.6 内参基因的标准曲线 | 第88-90页 |
| 5.2.7 内参基因在不同处理(不同培养条件)中的转录水平 | 第90页 |
| 5.2.8 目的基因的PCR扩增及测序 | 第90-91页 |
| 5.2.9 目的基因的标准曲线 | 第91-93页 |
| 5.2.10 目的基因在不同处理(不同培养条件)中的转录水平 | 第93-94页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第94-96页 |
| 6 基于RNA-Seq技术的共生菌转录组学研究 | 第96-112页 |
| 6.1 材料与方法 | 第96-99页 |
| 6.1.1 供试菌种的选择 | 第96页 |
| 6.1.2 菌株A.areolatum YQL03培养条件 | 第96页 |
| 6.1.3 样品RNA的制备和I llumina测序 | 第96-97页 |
| 6.1.4 序列组装 | 第97页 |
| 6.1.5 功能注释和生物路径分析 | 第97-98页 |
| 6.1.6 共生菌致病性相关基因的筛选与分析 | 第98页 |
| 6.1.7 差异表达基因的分析 | 第98-99页 |
| 6.2 结果与分析 | 第99-109页 |
| 6.2.1 RNA样品检测 | 第99-100页 |
| 6.2.2 I llumina测序与组装 | 第100-103页 |
| 6.2.3 功能注释与代谢分析 | 第103页 |
| 6.2.4 GO(Gene ontology)分类 | 第103-104页 |
| 6.2.5 KOG分类 | 第104-105页 |
| 6.2.6 KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)注释 | 第105-106页 |
| 6.2.7 共生菌致病性相关基因的筛选与分析 | 第106-108页 |
| 6.2.8 转录组差异表达基因 | 第108-109页 |
| 6.3 小结与讨论 | 第109-112页 |
| 7 主要结论及创新 | 第112-114页 |
| 7.1 主要结论 | 第112-113页 |
| 7.2 主要创新 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-127页 |
| 个人简介 | 第127-128页 |
| 导师简介 | 第128-130页 |
| 在读期间发表论文的目录清单 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
