烟草碳酸酐酶基因的克隆及其生物信息学分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1. 植物的光合作用 | 第12-13页 |
| ·光合作用 | 第12页 |
| ·光合作用对作物产量的影响 | 第12-13页 |
| 2. 碳酸酐酶(CA) | 第13-17页 |
| ·碳酸酐酶(CA)家族比较 | 第14页 |
| ·碳酸酐酶(CA)的功能 | 第14-17页 |
| ·高等植物中碳酸酐酶的基因表达 | 第15-16页 |
| ·高等植物中碳酸酐酶的功能 | 第16页 |
| ·植物碳酸酐酶(CA)的活性 | 第16-17页 |
| 3 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 4 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 碳酸酐酶基因的克隆及组织表达分析 | 第19-36页 |
| 1 试验材料 | 第19-20页 |
| ·试验材料和试剂 | 第19页 |
| ·常用试剂配方 | 第19页 |
| ·试验中所用的培养基配方 | 第19-20页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第20页 |
| ·试验仪器及设备 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-25页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·烟草总RNA提取 | 第20-21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测RNA | 第21页 |
| ·RT-PCR | 第21-22页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第22-23页 |
| ·目的片段与T-载体连接 | 第23-24页 |
| ·连接产物的转化(热激法) | 第24页 |
| ·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| ·测序及序列分析 | 第25页 |
| 3. 结果与分析 | 第25-36页 |
| ·烟草总RNA的提取及鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26页 |
| ·碳酸酐酶(CA)基因序列分析及氨基酸序列推导 | 第26-27页 |
| ·序列相似性分析 | 第27-28页 |
| ·CA蛋白序列多种比对及构建系统进化树 | 第28-30页 |
| ·CA蛋白质的理化性质分析 | 第30页 |
| ·亲疏水性分析 | 第30-31页 |
| ·CA蛋白质的信号肽预测 | 第31-32页 |
| ·CA蛋白功能结构域分析 | 第32页 |
| ·CA亚细胞定位分析 | 第32-33页 |
| ·CA蛋白二级结构及三级结构预测分析 | 第33-36页 |
| ·CA基因在烟草茎、叶及花组织上的表达量分析 | 第36页 |
| 第三章 烟草CA的遗传转化 | 第36-49页 |
| 1 试验材料 | 第36-38页 |
| ·植物材料和试剂 | 第36页 |
| ·菌株及载体 | 第36-37页 |
| ·常用试剂及培养基配方 | 第37-38页 |
| ·仪器和设备 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38-42页 |
| ·pBI121-NtCA表达载体的构建 | 第38页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第38-39页 |
| ·表达载体pBI121-NtCA转化农杆菌 | 第39页 |
| ·农杆菌侵染叶盘法转目的基因 | 第39-40页 |
| ·烟草叶盘准备 | 第39页 |
| ·农杆菌液准备 | 第39-40页 |
| ·农杆菌侵染 | 第40页 |
| ·分化及生根培养 | 第40页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第40-42页 |
| ·DNA提取 | 第40-41页 |
| ·PCR检测 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·pBI121-NtCA表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·表达载体pBI121-NtCA转化农杆菌 | 第43页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第43-44页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第44-45页 |
| 4 结论与讨论 | 第45-49页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·CA基因的克隆及CA类型 | 第46页 |
| ·CA的组织表达 | 第46-47页 |
| ·CA对光合作用及植株产量、品质的影响 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
