| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| ·延长药物半衰期的策略 | 第9-10页 |
| ·第一类策略：增加分子的流体力学半径 | 第10-12页 |
| ·聚乙二醇(PEG)化蛋白质多肽类药物的定点修饰策略 | 第10-11页 |
| ·重组PEG模拟多肽 | 第11-12页 |
| ·糖基化修饰 | 第12页 |
| ·第二类策略：增加FcRn介导的再利用过程 | 第12-13页 |
| ·Fc engineering延长免疫球蛋白的体内半衰期 | 第12页 |
| ·Fc融合蛋白 | 第12页 |
| ·白蛋白融合蛋白 | 第12-13页 |
| ·非共价连接血清白蛋白 | 第13页 |
| ·第三类策略：调节胞内体的蛋白受体复合物稳定性 | 第13-14页 |
| ·分子设计G-CSF | 第13-14页 |
| ·分子改造抗IL-6受体抗体 | 第14页 |
| ·第四类策略：缓释给药系统 | 第14-15页 |
| ·聚合体微球给药系统 | 第14页 |
| ·脂质给药系统 | 第14-15页 |
| 展望 | 第15-16页 |
| 符号和缩写 | 第16-17页 |
| 2. 引言 | 第17-19页 |
| ·重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)简介 | 第17页 |
| ·聚乙二醇(PEG)修饰技术 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18页 |
| ·研究目标 | 第18页 |
| ·实验流程 | 第18-19页 |
| 3. 材料和方法 | 第19-31页 |
| ·菌种、细胞株及实验动物 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·溶液配制 | 第21-22页 |
| ·PEG-rhG-CSF的制备工艺的研究 | 第22-28页 |
| ·目的蛋白表达形式的鉴定 | 第22页 |
| ·菌体破碎溶液的选择 | 第22-23页 |
| ·包涵体的第一次洗涤 | 第23页 |
| ·包涵体的第二次洗涤 | 第23页 |
| ·包涵体的变性 | 第23页 |
| ·包涵体复性条件的优化 | 第23-26页 |
| ·rhG-CSF的纯化 | 第26页 |
| ·rhG-CSF样品的纯度分析 | 第26页 |
| ·PEG修饰rhG-CSF反应条件的优化 | 第26-27页 |
| ·PEG-rhG-CSF的纯化 | 第27页 |
| ·免疫印迹反应 | 第27-28页 |
| ·BCA蛋白浓度测定 | 第28页 |
| ·rhG-CSF和PEG-rhG-CSF生物活性的测定 | 第28-29页 |
| ·体外活性测定 | 第28页 |
| ·体内活性测定 | 第28-29页 |
| ·PEG-rhG-CSF的稳定性研究 | 第29-31页 |
| ·PEG-rhG-CSF的保存条件研究 | 第29-30页 |
| ·稳定性影响因素研究 | 第30-31页 |
| 4. 实验结果 | 第31-49页 |
| ·PEG-rhG-CSF制备工艺的研究 | 第31-42页 |
| ·rhG-CSF蛋白表达形式鉴定 | 第31页 |
| ·从洗涤到变性液的流程分析 | 第31-34页 |
| ·复性工艺优化 | 第34-37页 |
| ·透析结果 | 第37-38页 |
| ·阳离子交换层析 | 第38页 |
| ·纯度分析 | 第38-39页 |
| ·PEG修饰条件优化 | 第39-41页 |
| ·PEG-rhG-CSF的分离纯化 | 第41页 |
| ·Western-Blot鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·PEG-rhG-CSF生物活性的测定 | 第42-46页 |
| ·细胞铺板数的确立 | 第42页 |
| ·MTT法检测细胞活性 | 第42-44页 |
| ·体内活性实验 | 第44-45页 |
| ·修饰前后半衰期比较 | 第45-46页 |
| ·PEG-rhG-CSF的稳定性研究 | 第46-49页 |
| ·保存浓度的影响 | 第46页 |
| ·保存温度的影响 | 第46-47页 |
| ·保存pH值的影响 | 第47页 |
| ·保护剂种类的影响 | 第47-48页 |
| ·高温实验 | 第48页 |
| ·光照实验 | 第48-49页 |
| 5. 讨论 | 第49-51页 |
| ·rhG-CSF的复性和PEG-丙醛对其修饰 | 第49页 |
| ·PEG-rhG-CSF的生物活性检测 | 第49-50页 |
| ·PEG-rhG-CSF的稳定性 | 第50-51页 |
| 6. 结论 | 第51-52页 |
| ·rhG-CSF的复性条件的优化 | 第51页 |
| ·PEG-丙醛对rhG-CSF修饰反应条件的优化 | 第51页 |
| ·PEG-rhG-CSF和原型的体外活性检测对比 | 第51页 |
| ·PEG-rhG-CSF和原型的体内活性检测对比 | 第51页 |
| ·PEG-rhG-CSF在不同保存环境下的稳定性 | 第51页 |
| ·PEG-rhG-CSF在强制降解实验中的稳定性 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
