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基于转录组测序的石斛黄酮类化合物生物合成相关基因的克隆与表达分析

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 前言第11-25页
   ·铁皮石斛研究概况第11-14页
     ·铁皮石斛的分类地位与分布第11页
     ·铁皮石斛的生境与形态特征第11-12页
     ·铁皮石斛的研究现状第12-14页
   ·药用植物转录组学的研究进展第14-16页
     ·转录组学及其研究方法第14-15页
     ·药用植物转录组学的研究意义第15页
     ·转录组测序技术在药用植物研究中的应用第15-16页
     ·铁皮石斛的转录组学研究进展第16页
   ·药用植物黄酮类化合物生物代谢途径的研究进展第16-22页
     ·黄酮类化合物及其分布第16-17页
     ·黄酮类化合物的结构及分类第17页
     ·黄酮类化合物的生理和药理功能研究第17-18页
     ·黄酮类化合物生物合成途径及相关功能基因的研究第18-20页
     ·查尔酮合成酶基因的研究进展第20-21页
     ·石斛属植物中黄酮类化合物的研究第21-22页
   ·研究目的和意义第22-23页
   ·研究内容第23-24页
   ·技术路线第24-25页
第二章 材料与方法第25-47页
   ·实验材料第25-27页
     ·植物材料第25页
     ·仪器设备第25-26页
     ·酶与分子生物学试剂第26-27页
     ·菌株与载体第27页
   ·铁皮石斛转录组测序第27-29页
     ·铁皮石斛样品的采集与处理第27页
     ·铁皮石斛总RNA的提取第27-29页
     ·转录组文库的建立与测序第29页
   ·铁皮石斛CHS基因的克隆及原核表达第29-43页
     ·铁皮石斛总RNA的提取第29页
     ·CHS基因保守片段cDNA序列的获得第29-33页
     ·DcCHS基因全长cDNA序列的获得第33-39页
     ·DcCHS基因原核表达载体的构建及检测第39-43页
   ·铁皮石斛黄酮类化合物合成相关基因的荧光定量表达第43-47页
     ·材料选取第43页
     ·不同组织总RNA的提取第43-44页
     ·DcF3H和DcDFR基因保守序列的克隆第44-45页
     ·DcCHS、DcF3H和DcDFR基因的荧光定量表达第45-47页
第三章 铁皮石斛转录组测序结果分析第47-56页
   ·RNA样品的检测第47-48页
   ·转录组测序结果的组装与注释第48-50页
   ·差异表达基因分析第50-53页
     ·差异表达基因GO功能分析第51-52页
     ·差异表达基因Pathway功能分析第52-53页
   ·黄酮类化合物生物合成相关基因的筛选第53-56页
第四章 铁皮石斛CHS基因的克隆及原核表达分析第56-69页
   ·铁皮石斛总RNA检测第56页
   ·DcCHS基因的cDNA序列第56-59页
   ·DcCHS基因的生物信息学分析第59-65页
     ·DcCHS基因cDNA全长序列分析第59-61页
     ·DcCHS基因编码的氨基酸及蛋白特性分析第61-64页
     ·DcCHS基因的进化分析第64-65页
   ·PET32a-DcCHS原核表达载体的构建第65-66页
   ·DcCHS蛋白的诱导表达和酶活鉴定第66-69页
第五章 DcCHS、DcF3H和DcDFR基因的荧光定量表达分析第69-77页
   ·RNA的检测第69-70页
   ·DcF3H和DcDFR基因的保守序列第70-71页
   ·DcCHS、DcF3H和DcDFR基因的荧光定量表达分析第71-77页
第六章 讨论第77-81页
   ·转录组测序与功能注释的探讨第77-78页
   ·铁皮石斛黄酮类化合物生物合成相关基因的探讨第78页
   ·DcCHS基因及其进化的探讨第78-79页
   ·DcCHS基因的原核表达及产物检测的探讨第79页
   ·利用荧光定量PCR法检测基因表达的探讨第79-81页
第七章 总结与展望第81-83页
参考文献第83-93页
致谢第93-95页
攻读学位期间的研究成果第95-96页

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