| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·微生物油脂及特氏杜氏藻 | 第11-13页 |
| ·微生物油脂 | 第11-12页 |
| ·微藻生物柴油 | 第12页 |
| ·杜氏藻属及特氏杜氏藻 | 第12-13页 |
| ·乙酰CoA合成酶（ACS）及油脂代谢通路 | 第13-19页 |
| ·油脂代谢通路的基因工程研究 | 第13-17页 |
| ·乙酰CoA合成酶（ACS） | 第17-18页 |
| ·国内外研究现状 | 第18-19页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术 | 第19-20页 |
| ·本章小结 | 第20-22页 |
| 第二章 特氏杜氏藻ACS基因的克隆及生物信息学分析 | 第22-50页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料与仪器 | 第22-27页 |
| ·藻种和培养液 | 第22-23页 |
| ·质粒和菌种 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·常用试剂的配制 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·特氏藻的培养 | 第27-28页 |
| ·特氏藻总 RNA 的提取与测定 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第29-40页 |
| ·生物信息学分析DtACS | 第40-41页 |
| ·DtACS的物理化学性质分析 | 第40页 |
| ·DtACS氨基酸序列相似性搜索和保守结构域预测 | 第40页 |
| ·DtACS亚细胞定位分析 | 第40页 |
| ·DtACS同源性比对以及系统发育树构建 | 第40页 |
| ·DtACS结构预测 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-49页 |
| ·DtACS cDNA克隆 | 第41-43页 |
| ·生物信息学分析DtACS | 第43-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 构建原核表达载体pET-32a(+)-DtACS和工程菌pET-32a(+)-DtACS-BL21(DE3) | 第50-58页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·实验材料与仪器 | 第51页 |
| ·目的条带的扩增、分离、回收、连接、转化与测序 | 第51-56页 |
| ·扩增目的条带 | 第51页 |
| ·回收目的DNA片段 | 第51页 |
| ·线性化载体的制备 | 第51-52页 |
| ·纯化酶切产物 | 第52-53页 |
| ·连接 | 第53页 |
| ·转化连接产物 | 第53-54页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第54-55页 |
| ·双酶切鉴定 | 第55页 |
| ·测序与保存 | 第55页 |
| ·转化至E.coli BL21 (DE3)感受态细胞 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-57页 |
| ·菌液PCR进行阳性克隆检测 | 第56页 |
| ·双酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 在大肠杆菌中异源表达纯化重组DtACS | 第58-74页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·异源表达纯化重组DtACS | 第58-63页 |
| ·确定最适表达条件 | 第58-59页 |
| ·SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳流程 | 第59-60页 |
| ·大量表达重组蛋白 | 第60-61页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第61-63页 |
| ·重组DtACS酶活力的测定 | 第63-65页 |
| ·酶活力测定反应体系 | 第63-64页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第64页 |
| ·比酶活计算公式 | 第64页 |
| ·DtACS动力学分析以及其最适pH值和温度的测定 | 第64-65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-73页 |
| ·蛋白表达预实验 | 第65页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第65-67页 |
| ·DtACS酶活测定 | 第67-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 结论与展望 | 第74-76页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 创新点 | 第75页 |
| 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 答辨委员会对论文的评定意见 | 第83页 |
