| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| ·苯并芘和菲对海洋生物的毒性效应 | 第10-13页 |
| ·细胞色素P450酶概述 | 第13-14页 |
| ·细胞色素P450酶对多环芳烃的转化代谢作用 | 第14-15页 |
| ·研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二章 双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)CYP4分子的原核表达、蛋白纯化及抗体制备 | 第16-41页 |
| ·材料与方法 | 第16-20页 |
| ·实验动物 | 第16-17页 |
| ·试剂及工具酶 | 第17页 |
| ·质粒与菌种 | 第17-18页 |
| ·实验仪器与设备 | 第18-19页 |
| ·溶液的配制 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-29页 |
| ·双齿围沙蚕CYP4原核表达载体的构建 | 第20-26页 |
| ·CYP4引物设计 | 第20页 |
| ·总RNA的提取。 | 第20-21页 |
| ·反转录 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增 | 第22页 |
| ·CYP4的纯化与回收 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ORF的构建 | 第23页 |
| ·pMD18-T-ORF重组质粒的转化与鉴定 | 第23-24页 |
| ·pMD18-T-ORF重组质粒提取 | 第24页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ORF与表达质粒的双酶切 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化与鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的提取 | 第26页 |
| ·pET-28a-ORF重组蛋白的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·pET-28a-ORF重组蛋白的诱导表达的可溶性分析 | 第26页 |
| ·IPTG诱导浓度的优化 | 第26页 |
| ·诱导温度的优化 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白的纯化及抗体制备 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白包涵体的大量表达及洗涤 | 第27页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第27页 |
| ·融合蛋白的复性 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白的浓度测定 | 第28页 |
| ·多克隆抗体的Western检测 | 第28-29页 |
| ·实验结果 | 第29-39页 |
| ·RNA的提取结果 | 第29页 |
| ·双齿围沙蚕CYP4 ORF目的片段扩增结果 | 第29-30页 |
| ·pMD-18T-ORF的构建和转化 | 第30-32页 |
| ·pET-28a-ORF构建和转化 | 第32-33页 |
| ·pET-28a-ORF的诱导表达 | 第33-35页 |
| ·pET-28a-ORF重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白含量的测定 | 第37-38页 |
| ·多克隆抗体的检测 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 典型多环芳烃对双齿围沙蚕CYP4基因表达的影响 | 第41-53页 |
| ·材料与方法 | 第42页 |
| ·实验药品 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·实验浓度的设计 | 第42页 |
| ·诱导实验 | 第42-43页 |
| ·总RNA提取 | 第43页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-51页 |
| ·总RNA提取结果 | 第45-46页 |
| ·标准曲线的建立 | 第46-49页 |
| ·β-actin的标准曲线 | 第46-48页 |
| ·双齿围沙蚕CYP4基因标准曲线 | 第48-49页 |
| ·不同浓度B(a)P诱导双齿围沙蚕CYP4基因表达结果 | 第49-50页 |
| ·不同浓度的菲诱导双齿围沙蚕CYP4基因表达结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 苯并芘及菲对双齿围沙蚕CYP4蛋白表达的影响 | 第53-63页 |
| ·材料与方法 | 第53-54页 |
| ·实验药品 | 第53-54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·实验浓度设计 | 第54页 |
| ·诱导实验 | 第54页 |
| ·间接ELISA方法建立 | 第54-56页 |
| ·间接ELISA操作步骤 | 第54-55页 |
| ·间接ELISA的建立 | 第55页 |
| ·抗原、一抗最佳包被浓度确定 | 第55页 |
| ·间接ELISA方法确定标准曲线 | 第55页 |
| ·两种有机污染物胁迫间接ELISA检测 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-61页 |
| ·最佳抗原稀释度和最佳一抗稀释度 | 第56页 |
| ·抗原最佳包被时间 | 第56-57页 |
| ·最佳封闭时间 | 第57页 |
| ·最佳一抗孵育时间 | 第57-58页 |
| ·最佳二抗孵育时间 | 第58页 |
| ·最佳显色时间 | 第58页 |
| ·双齿围沙蚕CYP4定量标准曲线 | 第58-59页 |
| ·不同浓度B(a)P诱导双齿围沙蚕CYP4蛋白表达结果 | 第59-60页 |
| ·不同浓度菲诱导双齿围沙蚕CYP4蛋白表达结果 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
