| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| ·粘附连接的结构及其相关分子 | 第9-10页 |
| ·粘附连接的结构特征 | 第9页 |
| ·参与粘附连接形成的主要分子 | 第9-10页 |
| ·粘附连接的形成 | 第10-13页 |
| ·E-cadherin 蛋白及其功能 | 第10-11页 |
| ·nectin 蛋白及其功能 | 第11-12页 |
| ·粘附连接相关的信号通路 | 第12-13页 |
| ·Ras 家族G 蛋白概述 | 第13-18页 |
| ·Rap1 相关蛋白及其与粘附连接的关系 | 第14-15页 |
| ·Ras 蛋白及其功能 | 第15-16页 |
| ·Rap1 与Ras 的关系 | 第16-17页 |
| ·Rap1 和H-Ras 的效应因子afadin/AF6 对粘附连接的作用 | 第17-18页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-31页 |
| ·材料 | 第19-22页 |
| ·质粒载体 | 第19页 |
| ·实验中使用引物及序列 | 第19-20页 |
| ·细胞系 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第21页 |
| ·主要分析软件 | 第21页 |
| ·培养基及其配制 | 第21-22页 |
| ·缓冲液及其他溶液的配制 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-30页 |
| ·引物设计及PCR 扩增 | 第22-25页 |
| ·E-cad-GFPN1、H-Ras-GFPC1 重组体构建及转化 | 第25-27页 |
| ·MCF7 细胞的培养及转染 | 第27-28页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第28页 |
| ·GFP 回收纯化融合蛋白 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE 的配制及电泳 | 第29页 |
| ·western blotting | 第29页 |
| ·免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 钙离子转换对MCF7 细胞形态及E-cadherin 的影响 | 第31-42页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·重组体质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·E-cadherin 的PCR 扩增 | 第31页 |
| ·重组体的构建及酶切验证 | 第31-32页 |
| ·E-cadherin 的序列测定 | 第32页 |
| ·钙离子转换模型下MCF7 细胞表型的变化 | 第32-33页 |
| ·Rap1、H-Ras、E-cadherin 细胞内定位的观察 | 第33-35页 |
| ·E-cadherin 的转染结果及内源表达的E-cadherin 定位观察 | 第33-34页 |
| ·Rap1 和H-Ras 的细胞内定位观察 | 第34-35页 |
| ·钙离子转换前后E-cadherin、Rap1 及H-Ras 的细胞内定位变化 | 第35-39页 |
| ·E-cadherin 的细胞内定位变化 | 第35-36页 |
| ·Rap1 的细胞内定位变化 | 第36-37页 |
| ·H-Ras 的细胞内定位变化 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 Rap1 和H-Ras 共同相互作用蛋白的研究 | 第42-47页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·重组体的构建 | 第42-43页 |
| ·H-Ras PCR 扩增结果 | 第42页 |
| ·重组体的构建和PCR 检测鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组体的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·H-Ras 基因序列测定 | 第43页 |
| ·钙离子转换模型下Rap1 和H-Ras 相互作用蛋白的研究 | 第43-46页 |
| ·Rap1-GFP 和H-Ras-GFP 的细胞转染 | 第44-45页 |
| ·钙离子转换前后与 Rap1 相互作用的 PI3K | 第45页 |
| ·钙离子转换前后与 H-Ras 相互作用的 PI3K | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第5章 Rap1 和H-Ras 的过表达对E-cadherin 的影响 | 第47-51页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·Rap1 和H-Ras 分别过表达对E-cadherin 细胞内定位的影响 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
