| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 慢病毒介导RNA干扰对体外培养大鼠胶质瘤细胞IL-33基因的沉默效应 | 第17-40页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 1 实验材料 | 第18-20页 |
| ·主要仪器与设备 | 第18页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第18-19页 |
| ·质粒和细胞 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-30页 |
| ·IL-33基因RNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定 | 第20-26页 |
| ·siRNA靶点设计 | 第20页 |
| ·大鼠IL33siRNA的设计与合成 | 第20-21页 |
| ·双链DNA制备 | 第21页 |
| ·双链低聚体与载体的连接 | 第21-22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第22-23页 |
| ·阳性质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·IL-33基因shRNA慢病毒载体的包装 | 第24-25页 |
| ·慢病毒的收集与浓缩 | 第25-26页 |
| ·滴度稀释法测定慢病毒滴度 | 第26页 |
| ·重组慢病毒载体对体外培养大鼠胶质瘤细胞IL-33基因的干扰效应 | 第26-29页 |
| ·重组慢病毒靶细胞转染 | 第26-27页 |
| ·R./0-T12.3PCR检测转染重组后C6细胞IL-33MRNA表达水平的变化 | 第27-29页 |
| ·统计学处理 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-37页 |
| ·菌落PCR鉴定结果（图 1-3） | 第30-31页 |
| ·构建的RNA干扰重组质粒的测序结果 | 第31-32页 |
| ·慢病毒包装和滴度测定结果 | 第32-34页 |
| ·慢病毒介导RNA干扰对C6细胞荧光观测结果 | 第34-35页 |
| ·慢病毒介导RNA干扰对C6细胞IL-332RNA的沉默效应 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| ·RNA1技术应用的特点 | 第37页 |
| ·慢病毒介导RNA1的特点 | 第37-38页 |
| ·慢病毒载体转染效率验证 | 第38-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| ·成功构建了大鼠IL-33基因RNA干扰慢病毒载体 | 第39页 |
| ·体外转染C6细胞，验证其干扰效率，并筛选出有效靶点 | 第39-40页 |
| 第二章 脊髓IL-33对佐剂性关节炎大鼠外周炎症及痛觉过敏的调控 | 第40-64页 |
| 引言 | 第40-41页 |
| 1 实验材料 | 第41-45页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要设备和仪器 | 第41-42页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第42-43页 |
| ·主要实验试剂配制 | 第43-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-53页 |
| ·动物实验分组 | 第45页 |
| ·鞘内置管 | 第45-46页 |
| ·动物模型构建 | 第46-47页 |
| ·疼痛相关行为学评估 | 第47-48页 |
| ·机械痛阈检测 | 第47页 |
| ·热痛阈值检测 | 第47-48页 |
| ·组织取材 | 第48页 |
| ·Western blot 检测脊髓 IL-33 蛋白的表达 | 第48-51页 |
| ·蛋白提取 | 第48-49页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第49页 |
| ·分装蛋白 | 第49页 |
| ·凝胶配制 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·湿法转膜 | 第50页 |
| ·封闭 | 第50页 |
| ·孵育一抗 | 第50页 |
| ·洗膜 | 第50页 |
| ·孵育二抗 | 第50-51页 |
| ·洗膜 | 第51页 |
| ·ECL发光 | 第51页 |
| ·关节炎评估 | 第51-52页 |
| ·足趾、关节体积测定 | 第51页 |
| ·关节病理学组织检查和评分 | 第51-52页 |
| ·统计学处理 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-60页 |
| ·佐剂性关节炎大鼠模型的建立及评价 | 第53-57页 |
| ·模型大鼠机械痛阈的变化 | 第53-54页 |
| ·模型大鼠热痛阈的变化 | 第54页 |
| ·模型大鼠足趾、关节肿胀的变化 | 第54-55页 |
| ·模型大鼠关节病理学改变 | 第55-56页 |
| ·模型大鼠脊髓IL-33蛋白水平表达变化 | 第56-57页 |
| ·慢病毒重组体沉默IL-33基因对佐剂性关节炎大鼠脊髓IL-33蛋白水平的影响 | 第57-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| ·佐剂性关节炎大鼠模型的构建 | 第60页 |
| ·脊髓IL-33对佐剂性关节炎大鼠外周炎症和痛觉过敏的可能影响 | 第60-61页 |
| ·中枢对外周炎症的调控 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| ·成功构建佐剂关节炎大鼠模型，外周炎症上调了脊髓IL-33蛋白的表达 | 第63页 |
| ·鞘内注射LV-4:RNA-IL-33可以抑制脊髓IL-33蛋白水平的表达，L-33可能参与了外周炎症的调控 | 第63-64页 |
| 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 综述 | 第69-79页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 攻读硕士学位期间主要成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 导师评阅表 | 第81页 |
