| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| ·Clusterin概述 | 第9-16页 |
| ·Clusterin的结构 | 第9-11页 |
| ·Clusterin的表达调控 | 第11-12页 |
| ·Clusterin的功能 | 第12-14页 |
| ·Clusterin与疾病 | 第14-16页 |
| ·细胞爬片及免疫组化 | 第16页 |
| ·电转染法 | 第16-17页 |
| ·荧光定量PCR | 第17-18页 |
| ·本研究的意义和主要内容 | 第18页 |
| 2 实验一 Clusterin基因的克隆及实时荧光定量PCR | 第18-38页 |
| ·实验材料与方法 | 第18-19页 |
| ·质粒、载体及细胞系 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-28页 |
| ·双峰驼肾脏RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR | 第20页 |
| ·Clusterin基因上段的扩增 | 第20-24页 |
| ·3'-FULL RACE扩增基因下段 | 第24页 |
| ·基因编码区的获得 | 第24-27页 |
| ·定量PCR | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-34页 |
| ·双峰驼Clusterin基因上段的获得 | 第28页 |
| ·3'-FULL RACE方法获得CLU基因下段 | 第28-29页 |
| ·双峰驼Clusterin基因编码区的获得 | 第29-31页 |
| ·双峰驼Clusterin基因序列分析 | 第31-33页 |
| ·定量PCR结果 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-38页 |
| 3 实验二 真核表达载体的构建和转染Clusterin基因细胞系的建立 | 第38-45页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·实验设备和耗材 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·双峰驼Clusterin与pEGFP-N1的连接及鉴定 | 第39-40页 |
| ·细胞的转染 | 第40-41页 |
| ·细胞的G418筛选 | 第41页 |
| ·单克隆细胞的扩大培养 | 第41页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-44页 |
| ·目的基因Clusterin与pEGFP-N1载体的连接 | 第42页 |
| ·Hela细胞电转染结果 | 第42-43页 |
| ·DNA水平鉴定 | 第43-44页 |
| ·RNA水平鉴定 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 4 实验三 细胞免疫组化 | 第45-47页 |
| ·实验材料与方法 | 第45-46页 |
| ·主要试剂的配制 | 第45页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47页 |
| 5 结论 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
