| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 H1N1病毒感染细胞后Cirbp表达规律及亚细胞定位的研究 | 第16-25页 |
| 1 材料与方法 | 第17-19页 |
| ·细胞系及毒株 | 第17页 |
| ·病毒感染细胞 | 第17-18页 |
| ·爬片的准备 | 第17页 |
| ·细胞接毒 | 第17-18页 |
| ·反转录PCR检测H1N1流感病毒M基因 | 第18页 |
| ·组织样本总RNA的提取及cDNA合成 | 第18页 |
| ·PCR检测 | 第18页 |
| ·免疫组化法检测H1N1流感病毒感染后Cirbp的表达 | 第18-19页 |
| ·免疫组化一抗浓度的优化 | 第18页 |
| ·细胞爬片的免疫组化程序 | 第18页 |
| ·图片采集及数据分析 | 第18-19页 |
| ·免疫荧光技术检测H1N1病毒感染条件下Cirbp的亚细胞定位 | 第19页 |
| 2 结果 | 第19-23页 |
| ·H1N1流感病毒成功感染BHK-21，MH-S和PUVEC细胞系 | 第19-20页 |
| ·H1N1 PR-8 流感病毒感染BHK-21细胞后Cirbp的动态表达 | 第20页 |
| ·H1N1 PR-8 流感病毒感染MH-S细胞后Cirbp的动态表达 | 第20-21页 |
| ·H1N1猪流感病毒感染PUVEC细胞后Cirbp的动态表达 | 第21-23页 |
| ·H1N1流感病毒感染情况下Cirbp的亚细胞定位 | 第23页 |
| 3 讨论 | 第23-24页 |
| 4 小结 | 第24-25页 |
| 第二章 敲低Cirbp对H1N1流感病毒mRNA稳定性的影响 | 第25-39页 |
| 1 材料和方法 | 第26-32页 |
| ·细胞系、载体、菌株和毒株 | 第26页 |
| ·敲低Cirbp慢病毒载体的构建 | 第26-28页 |
| ·干扰Cirbp引物序列设计 | 第26页 |
| ·：病毒载体酶切回收： | 第26-27页 |
| ·合成引物退火处理 | 第27页 |
| ·将双酶切载体和目的基因片段进行连接反应： | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·菌液PCR鉴定及测序鉴定 | 第28页 |
| ·敲低Cirbp的BHK-21（Cirbp-BHK-21）细胞系的构建及验证 | 第28-30页 |
| ·慢病毒生产 | 第28-29页 |
| ·慢病毒感染细胞 | 第29页 |
| ·Real-time PCR检测Cirbp的表达 | 第29页 |
| ·Western-blot检测Cirbp蛋白水平的表达 | 第29-30页 |
| ·Real-time PCR方法检测敲低Cirbp对H1N1病毒mRNA半衰期的影响 | 第30页 |
| ·Real-time PCR方法检测敲低Cirbp对H1N1病毒mRNA，cRNA和vRNA的影响 | 第30-31页 |
| ·免疫荧光技术检测敲低Cirbp对H1N1病毒NP蛋白合成的影响 | 第31页 |
| ·在BHK-21和Cirbp-BHK-21细胞上测定H1N1的TCID50效价 | 第31-32页 |
| 2 结果 | 第32-36页 |
| ·验证Cirbp-BHK-21细胞系的Real-time PCR和western-blot结果 | 第32页 |
| ·敲低Cirbp降低H1N1流感病毒mRNA的稳定性 | 第32-33页 |
| ·敲低Cirbp抑制H1N1流感病毒mRNA，cRNA和vRNA的合成 | 第33-34页 |
| ·敲低Cirbp抑制H1N1流感病毒NP蛋白的表达 | 第34-35页 |
| ·H1N1感染Cirbp-BHK-21细胞的TCID50效价显著高于感染正常BHK-21细胞的TCID50效价 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 Cirbp过表达提高了H1N1病毒的复制效率并促进病毒vRNP出核转运 | 第39-46页 |
| 1 材料和方法 | 第40-42页 |
| ·细胞系和毒株 | 第40页 |
| ·过表达Cirbp对H1N1复制效率的影响 | 第40-41页 |
| ·免疫荧光技术检测Cirbp过表达对H1N1病毒粘附，穿入，入核转运和出核转运的影响 | 第41-42页 |
| ·在CIRP过表达及空载模型上研究对流感病毒穿入的影响 | 第41页 |
| ·在BHK-21 Cirp过表达及空载模型上分析H1N1病毒vRNPs的核定位 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-45页 |
| ·Cirbp过表达提高了H1N1病毒的复制效率 | 第42-43页 |
| ·Cirbp过表达促进了H1N1病毒vRNP的出核转运 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 H1N1病毒感染下Cirbp潜在靶分子的筛选及初步验证 | 第46-61页 |
| 1 材料和方法 | 第47-51页 |
| ·细胞系和毒株 | 第47页 |
| ·免疫共沉淀 | 第47-48页 |
| ·质谱分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白质胶内酶解 | 第48页 |
| ·肽段提取 | 第48页 |
| ·基于QE的液质联用分析 | 第48-49页 |
| ·数据处理、评估与分析 | 第49-50页 |
| ·数据库的选择 | 第49页 |
| ·数据搜索匹配（Mascot搜索） | 第49-50页 |
| ·鉴定质量评估 | 第50页 |
| ·鉴定蛋白的信息分析 | 第50页 |
| ·免疫荧光技术分析Cirbp与HSP90及NP蛋白的共定位 | 第50-51页 |
| ·Western-blot分析Cirbp过表达对HSP90表达的影响 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-58页 |
| ·SDS-PAGE检测免疫共沉淀靶蛋白 | 第52页 |
| ·质谱鉴定免疫共沉淀产物 | 第52-53页 |
| ·宿主细胞内Cirbp的潜在靶分子参与的信号通路 | 第53-55页 |
| ·潜在靶分子的COG注释 | 第55页 |
| ·潜在靶分子的GO注释分析 | 第55-57页 |
| ·Cirbp与潜在靶分子HSP90及NP蛋白的共定位验证 | 第57页 |
| ·过表达Cirbp上调Hsp90的表达 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 结论、创新点与不足 | 第61-62页 |
| 第五章 文献综述 | 第62-69页 |
| 1 hnRNPs的结构和生理功能 | 第62-64页 |
| 2 hnRNPs在病毒复制过程中的作用和机制 | 第64-68页 |
| ·hnRNPs通过与病毒核酸结合影响病毒复制 | 第65-67页 |
| ·hnRNPs与病毒RNA结合影响病毒复制 | 第65-66页 |
| ·hnRNPs与病毒DNA结合影响病毒复制 | 第66-67页 |
| ·hnRNPs通过与病毒蛋白结合影响病毒复制 | 第67页 |
| ·hnRNPs通过影响细胞凋亡影响病毒复制 | 第67-68页 |
| 3 小结与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 （一） | 第77-78页 |
| 附录 （二） | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
