| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·乳腺生物反应器 | 第10-13页 |
| ·乳腺特异性表达载体的构建 | 第10-13页 |
| ·乳蛋白上游调控序列的选择 | 第10-12页 |
| ·目的基因序列的选择 | 第12页 |
| ·显微注射技术研究进展 | 第12-13页 |
| ·白细胞介素-10(IL-10) | 第13-18页 |
| ·IL-10分子结构和来源 | 第13-14页 |
| ·人白细胞介素10基因的结构 | 第14页 |
| ·IL-10的生物学功能 | 第14-16页 |
| ·IL-10对B细胞的作用 | 第14-15页 |
| ·IL-10对T淋巴细胞的直接作用 | 第15页 |
| ·IL-10对调节性T细胞作用 | 第15页 |
| ·IL-10对单核/巨噬细胞的作用 | 第15-16页 |
| ·IL-10对自然杀伤细胞(natutal killer cell,NK)细胞的作用 | 第16页 |
| ·利用IL-10治疗疾病的研究进展 | 第16-17页 |
| ·IL-10应用前景 | 第17-18页 |
| ·胚胎移植技术 | 第18-20页 |
| ·早期胚胎生理 | 第18-19页 |
| ·移植方式对胚胎移植效果的影响 | 第19页 |
| ·胚胎的质量和数量对移植效果的影响 | 第19-20页 |
| ·受精卵的体外培养 | 第20页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorecence Protein EGFP) | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 人白细胞介素10基因的克隆及序列分析 | 第22-29页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·试剂和材料 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·常用试剂配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·PCR反应 | 第23页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第23-24页 |
| ·hIL-10与pGEM-T连接 | 第24页 |
| ·重组质粒的转化 | 第24-25页 |
| ·pGEM-hIL-10的酶切鉴定及测序 | 第25-26页 |
| ·结果与小结 | 第26-29页 |
| ·实验结果 | 第26-27页 |
| ·hIL-10的PCR扩增结果 | 第26页 |
| ·重组质粒pEGM-hIL-10的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-29页 |
| 4 牛β酪蛋白基因5'端的克隆及序列测定 | 第29-34页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·主要试剂和材料 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·常用试剂配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-32页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·牛血液DNA提取 | 第30页 |
| ·PCR反应 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-33页 |
| ·牛血液DNA提取 | 第32页 |
| ·牛β-CN基因5'调控序列的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 5 目的片段的制备 | 第34-40页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·主要试剂和材料 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·常用试剂配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·hIL-10与bβ-CN5'端调控序列的连接 | 第35页 |
| ·重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·连接产物的验证 | 第36-38页 |
| ·PCR检测 | 第36-37页 |
| ·双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-40页 |
| ·质粒验证结果 | 第38-40页 |
| ·PCR验证结果 | 第38页 |
| ·双酶切鉴定 | 第38页 |
| ·酶切产物的回收 | 第38-40页 |
| 6 EGFP编码序列的制备 | 第40-42页 |
| ·pEGFP-N1质粒的转化 | 第40页 |
| ·质粒的筛选与签定 | 第40页 |
| ·质粒双酶切 | 第40-41页 |
| ·胶回收 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-42页 |
| 7 转基因小鼠的构建 | 第42-50页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·试验试剂和材料 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·常用试剂配制 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·雄鼠的结扎 | 第43-44页 |
| ·小鼠超排和假孕小鼠的准备 | 第44页 |
| ·原核期受精卵的采集和观察 | 第44-45页 |
| ·显微注射 | 第45-46页 |
| ·显微工具的制作 | 第45页 |
| ·受精卵的显微注射 | 第45-46页 |
| ·胚胎的输卵管移植 | 第46-47页 |
| ·准备移植胚胎 | 第46页 |
| ·胚胎移植 | 第46页 |
| ·复苏 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-48页 |
| ·原核期胚胎的形态学观察与采集 | 第47页 |
| ·显微注射及胚胎移植结果 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 8 讨论与结论 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·目的基因的选择 | 第50页 |
| ·DNA结构、纯度、浓度对基因整合的影响 | 第50页 |
| ·影响显微注射效果的因素 | 第50-51页 |
| ·受精卵的体外培养对胚胎移植的影响 | 第51页 |
| ·超排效果对胚胎移植的影响 | 第51页 |
| ·结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| Abstract | 第60-62页 |
| 附件：hIL-10及bβ-CN测序结果 | 第62-66页 |