耐冷及嗜盐木聚糖酶的基因克隆、表达、酶学性质及突变研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| ·木聚糖 | 第13-14页 |
| ·木聚糖酶 | 第14-17页 |
| ·木聚糖水解酶系 | 第14-15页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第15-17页 |
| ·木聚糖酶的催化机制 | 第17-19页 |
| ·木聚糖酶的酶学性质 | 第19-20页 |
| ·木聚糖酶的最适作用pH值 | 第19-20页 |
| ·木聚糖酶的最适反应温度 | 第20页 |
| ·金属离子及化学试剂对木聚糖酶活性的影响 | 第20页 |
| ·嗜极木聚糖酶 | 第20-24页 |
| ·嗜碱/嗜酸木聚糖酶 | 第21-22页 |
| ·嗜热木聚糖酶 | 第22-23页 |
| ·嗜冷木聚糖酶 | 第23页 |
| ·嗜盐木聚糖酶 | 第23-24页 |
| ·嗜极木聚糖酶的应用 | 第24-28页 |
| ·木聚糖酶在动物饲料中的应用 | 第24-25页 |
| ·木聚糖酶在食品工业中的应用 | 第25-26页 |
| ·在造纸技术中的应用 | 第26-27页 |
| ·在能源方面的应用 | 第27页 |
| ·在麻类纺织工业中的应用 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-47页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·溶液 | 第30-32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·细菌基因组DNA抽提 | 第32-33页 |
| ·碱裂解法抽提细菌的质粒DNA | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白 | 第34-35页 |
| ·木聚糖酶基因xynA的克隆 | 第35-37页 |
| ·木聚糖酶基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·木聚糖酶PCR产物回收及酶切 | 第36页 |
| ·酶连以及电转化 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第37页 |
| ·木聚糖酶XynA的诱导、表达及纯化 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-xynA转化 | 第37页 |
| ·木聚糖酶XynA的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·木聚糖酶XynA的纯化 | 第38页 |
| ·凝胶电泳和蛋白浓度的测定 | 第38-39页 |
| ·木聚糖酶XynA的酶学性质研究 | 第39-43页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| ·木聚糖酶活性的测定方法 | 第40页 |
| ·木聚糖酶的最适pH和最适温度 | 第40页 |
| ·木聚糖酶的pH稳定性和热稳定性 | 第40-41页 |
| ·木聚糖酶的底物特异性 | 第41页 |
| ·金属离子及化学试剂对酶活的影响 | 第41页 |
| ·木聚糖酶的最适盐浓度及盐耐受性 | 第41页 |
| ·NaCl对木聚糖酶热稳定性影响的测定 | 第41-42页 |
| ·荧光光谱法测定NaCl对木聚糖酶热稳定性的影响 | 第42页 |
| ·木聚糖酶的酶动力学测定 | 第42页 |
| ·同源模建 | 第42-43页 |
| ·木聚糖酶XynA的随机突变体库的构建 | 第43-47页 |
| ·易错PCR扩增xynA | 第43页 |
| ·易错PCR产物的回收与酶切 | 第43-44页 |
| ·酶连及转化 | 第44页 |
| ·验证随机突变体库的突变频率 | 第44-45页 |
| ·基于96孔板的高通量木聚糖酶突变文库筛选 | 第45页 |
| ·突变株蛋白的诱导表达和纯化 | 第45-46页 |
| ·突变菌株的基本酶学性质测定 | 第46页 |
| ·突变型菌株的酶动力学常数 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-65页 |
| ·木聚糖酶基因XynA的克隆 | 第47-48页 |
| ·木聚糖酶XynA的序列分析 | 第48-51页 |
| ·木聚糖酶基因的表达及纯化 | 第51-52页 |
| ·木聚糖酶XynA的酶学性质研究 | 第52-60页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第52页 |
| ·木聚糖酶XynA的最适pH和pH耐受 | 第52-53页 |
| ·木聚糖酶XynA的最适温度和热稳定性 | 第53-54页 |
| ·木聚糖酶的底物特异性 | 第54-55页 |
| ·木聚糖酶的最适盐浓度及盐耐受性 | 第55-56页 |
| ·NaCl对木聚糖酶热稳定性影响 | 第56页 |
| ·金属离子及化学试剂对酶活的影响 | 第56-57页 |
| ·荧光光谱学测定NaCl对木聚糖酶热稳定性的影响 | 第57页 |
| ·木聚糖酶的酶动力学测定 | 第57-59页 |
| ·木聚糖酶XynA的三维结构分析 | 第59-60页 |
| ·XynA基因的随机突变库的构建 | 第60-62页 |
| ·易错PCR法扩增木聚糖酶基因xynA | 第60-61页 |
| ·随机突变库突变频率检测 | 第61页 |
| ·高活性木聚糖酶的筛选 | 第61-62页 |
| ·突变株的酶学性质测定 | 第62-65页 |
| ·突变株的最适pH和最适温度 | 第62页 |
| ·突变株的最适盐浓度和盐耐受性 | 第62-63页 |
| ·突变株酶动力学参数的测定 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-72页 |
| ·野生型木聚糖酶的分析 | 第65-70页 |
| ·木聚糖酶随机突变分析 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 | 第81-84页 |
| 1. 木聚糖酶的核苷酸 | 第81-83页 |
| 2. 研究成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
