| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩写简表 | 第12-18页 |
| 1 引言 | 第18-43页 |
| ·手性药物简介 | 第18-25页 |
| ·手性药物 | 第18-19页 |
| ·手性药物的制备 | 第19-21页 |
| ·手性药物的动态动力学拆分 | 第21-23页 |
| ·R-邻氯扁桃酸甲酯的合成现状 | 第23-25页 |
| ·扁桃酸消旋酶和酯酶BioH及脂肪酶CALB的研究现状 | 第25-30页 |
| ·扁桃酸消旋酶的研究现状 | 第25-28页 |
| ·酯酶BioH的研究现状 | 第28-29页 |
| ·脂肪酶CALB的研究现状 | 第29-30页 |
| ·酶分子改造 | 第30-36页 |
| ·酶定向进化 | 第31-32页 |
| ·理性设计 | 第32-36页 |
| ·分子模拟技术 | 第36-40页 |
| ·量子力学方法 | 第36-37页 |
| ·分子力学法 | 第37-38页 |
| ·分子动力学 | 第38-40页 |
| ·分子对接 | 第40页 |
| ·课题研究的意义和内容 | 第40-43页 |
| 2 脂肪酶CALB对映体选择性定量预测模型的建立 | 第43-61页 |
| ·实验材料与方法 | 第44-50页 |
| ·QSAR分析数据采集 | 第44-46页 |
| ·脂肪酶CALB构象预处理 | 第46页 |
| ·底物分子预处理 | 第46-47页 |
| ·Autodock分子对接部分参数的调整 | 第47页 |
| ·分子对接 | 第47页 |
| ·底物活性构象的产生与底物叠合 | 第47-48页 |
| ·比较分子场分析法(CoMFA)和比较分子相似性分析(CoMSIA) | 第48-49页 |
| ·偏最小二乘(PLS)分析和模型验证 | 第49-50页 |
| ·实验结果和讨论 | 第50-60页 |
| ·CoMFA模型的建立和性能分析 | 第51-53页 |
| ·不同分子作用场对对映体选择性模型预测能力的影响 | 第53-56页 |
| ·CoMSIA模型的建立和预测性能分析 | 第56-58页 |
| ·CoMSIA作用场等势图分析 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 3 具有高S-邻氯扁桃酸甲酯选择性的酯酶BioH的理性设计 | 第61-81页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·工具酶 | 第62页 |
| ·试剂 | 第62页 |
| ·主要仪器 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-69页 |
| ·突变体的构建 | 第63-66页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第66-67页 |
| ·R-邻氯扁桃酸甲酯和S-邻氯扁桃酸甲酯的制备 | 第67页 |
| ·酶活测定 | 第67-68页 |
| ·动力学参数测定 | 第68页 |
| ·分子动力学模拟 | 第68-69页 |
| ·突变点自由能相互作用 | 第69页 |
| ·结果和讨论 | 第69-80页 |
| ·基于理性设计的第一代突变体的构建 | 第71页 |
| ·单点突变体催化活性及对映体选择性的测定 | 第71-74页 |
| ·单点突变体的分子动力学模拟及MM-PBSA分析 | 第74-78页 |
| ·基于单点结合的双点/三点突变体的对映体选择性的测定 | 第78-79页 |
| ·点/三点突变体的分子模拟及MM-PBSA分析 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 4 残基S139在扁桃酸消旋酶-底物复合物稳定中的作用探讨 | 第81-99页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-87页 |
| ·突变体S139A构建 | 第82-83页 |
| ·纯酶制备 | 第83页 |
| ·目标蛋白纯度表征 | 第83页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第83页 |
| ·圆二色谱分析 | 第83页 |
| ·R-型扁桃酸和S-型扁桃酸浓度-旋光值标准曲线 | 第83-84页 |
| ·酶活测定 | 第84-85页 |
| ·动力学参数测定 | 第85页 |
| ·分子动力学模拟 | 第85-86页 |
| ·MM-PBSA能量分析 | 第86-87页 |
| ·实验结果和讨论 | 第87-98页 |
| ·扁桃酸消旋酶与R-型/S-型/TS-扁桃酸的分子模拟及结合能计算 | 第87-88页 |
| ·消旋酶活性中心潜在关键氨基酸的鉴定 | 第88-93页 |
| ·氨基酸残基S139对消旋酶催化反应的影响 | 第93-94页 |
| ·突变体S139A的分子模拟 | 第94-98页 |
| ·小结 | 第98-99页 |
| 5 对非天然底物有高催化活性扁桃酸消旋酶的计算设计 | 第99-117页 |
| ·实验材料 | 第100-101页 |
| ·实验方法 | 第101-104页 |
| ·突变体的构建 | 第101-102页 |
| ·纯酶制备 | 第102页 |
| ·蛋白纯度表征 | 第102页 |
| ·R-型间氯扁桃酸,R-型邻氯扁桃酸和R-型扁桃酰胺浓度-旋光值标准曲线 | 第102-103页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第103页 |
| ·酶活测定 | 第103页 |
| ·动力学参数测定 | 第103页 |
| ·分子动力学模拟 | 第103-104页 |
| ·MM-PBSA分析 | 第104页 |
| ·统计分析 | 第104页 |
| ·实验结果和讨论 | 第104-116页 |
| ·第一轮突变体的构建 | 第104-105页 |
| ·基于酶-底物过渡态结合能的突变体筛选和实验验证 | 第105-111页 |
| ·第二轮突变体库的筛选和实验验证 | 第111-112页 |
| ·结合能分解和结构分析 | 第112-114页 |
| ·基于酶-底物过渡态结合能的计算设计模型在其余非天然底物的应用 | 第114-116页 |
| ·小结 | 第116-117页 |
| 6 动态动力学拆分制备R-邻氯扁桃酸甲酯 | 第117-130页 |
| ·实验材料 | 第117-118页 |
| ·实验方法 | 第118-120页 |
| ·邻氯扁桃酸及邻氯扁桃酸甲酯HPLC标准曲线制备 | 第118页 |
| ·乙酸乙酯对邻氯扁桃酸及邻氯扁桃酸甲酯萃取效率研究 | 第118页 |
| ·(R,S)-邻氯扁桃酸甲酯自水解 | 第118页 |
| ·扁桃酸消旋酶V22L最适反应条件的探讨 | 第118-119页 |
| ·酯酶BioH突变体L123A/L181V/L207F最适反应条件的探讨 | 第119页 |
| ·酯酶和消旋酶酶浓度比对动态动力学拆分的影响 | 第119-120页 |
| ·酶联用动态动力学拆分方法 | 第120页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)分析 | 第120页 |
| ·外消旋邻氯扁桃酸甲酯化 | 第120页 |
| ·实验结果和讨论 | 第120-129页 |
| ·邻氯扁桃酸及邻氯扁桃酸甲酯标准曲线的制备 | 第120-122页 |
| ·邻氯扁桃酸甲酯自水解 | 第122页 |
| ·乙酸乙酯对邻氯扁桃酸及邻氯扁桃酸甲酯萃取效率研究 | 第122-123页 |
| ·扁桃酸消旋酶V22L及酯酶BioH突变体L123A/L181V/L207F最适反应条件的探讨 | 第123-125页 |
| ·消旋酶/酯酶浓度比对动力学拆分过程的影响 | 第125-127页 |
| ·消旋酶对酯酶水解反应表观选择性的影响 | 第127-128页 |
| ·双酶联用动态动力学拆分制备R-邻氯扁桃酸甲酯 | 第128-129页 |
| ·小结 | 第129-130页 |
| 7 结论、创新点和展望 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-142页 |
| 作者简历 | 第142-143页 |
