| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 插图和附表清单 | 第18-21页 |
| 缩略词 | 第21-22页 |
| 第一章 绪言 | 第22-41页 |
| ·植物耐铝机制的研究进展 | 第22-28页 |
| ·酸性土壤与铝毒 | 第22-23页 |
| ·植物耐铝的生理机制 | 第23-27页 |
| ·内部耐受机制 | 第24页 |
| ·外部排斥机制 | 第24-27页 |
| ·植物耐铝的分子机制 | 第27-28页 |
| ·质膜H~+-ATPase的研究进展 | 第28-33页 |
| ·质膜H~+-ATPase的结构 | 第29-30页 |
| ·质膜H~+-ATPase的功能 | 第30-33页 |
| ·促进物质的次级跨膜转运 | 第30页 |
| ·调节细胞内的pH值 | 第30页 |
| ·参与气孔开闭的调节 | 第30-31页 |
| ·调节细胞的伸长生长 | 第31页 |
| ·植物质膜H~+-ATPase参与胁迫响应 | 第31-32页 |
| ·植物质膜H~+-ATPase参与柠檬酸分泌的调节 | 第32-33页 |
| ·植物14-3-3蛋白的研究进展 | 第33-40页 |
| ·14-3-3蛋白的分类 | 第33-34页 |
| ·14-3-3蛋白的结构 | 第34-35页 |
| ·植物14-3-3蛋白的功能 | 第35-40页 |
| ·参与植物基础代谢调节 | 第35页 |
| ·参与植物的抗逆性调节 | 第35-36页 |
| ·参与蛋白的定位的调节 | 第36-37页 |
| ·14-3-3蛋白参与信号转导调控 | 第37-38页 |
| ·植物14-3-3蛋白参与质膜H~+-ATPase活性调节 | 第38-40页 |
| ·本研究的目的和意义及内容 | 第40-41页 |
| 第二章 14-3-3蛋白和质膜H~+-ATPase的表达与互作参与黑大豆应答铝胁迫的机理分析 | 第41-56页 |
| ·材料和方法 | 第42-46页 |
| ·黑大豆的培养 | 第42页 |
| ·黑大豆的铝胁迫处理、相对根伸长量和根尖铝含量的测定 | 第42页 |
| ·Real time RT-PCR分析 | 第42-43页 |
| ·质膜的分离与纯化 | 第43-44页 |
| ·质膜纯度的检测和质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第44页 |
| ·Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP) | 第44-45页 |
| ·质膜H~+泵活性测定 | 第45页 |
| ·柠檬酸分泌量的测定 | 第45页 |
| ·根尖溴甲酚紫染色 | 第45-46页 |
| ·数据处理 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·铝胁迫对RB和SB根生长及根尖铝含量的影响 | 第46-47页 |
| ·铝胁迫对RB和SB根中gha2和SGF14基因转录水平的影响 | 第47-48页 |
| ·铝胁迫对质膜H~+-ATPase和14-3-3蛋白表达水平的影响 | 第48-49页 |
| ·铝胁迫对质膜H~+-ATPase磷酸化水平及其与14-3-3蛋白相互的影响 | 第49-50页 |
| ·铝胁迫对质膜H~+-ATPase活性和柠檬酸分泌的影响 | 第50-51页 |
| ·铝胁迫对RB和SB根尖H~+泵活性和根泌H~+能力的影响 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·RB和SB根中14-3-3和质膜H~+-ATPase基因的转录和翻译对铝胁迫的应答 | 第52-53页 |
| ·RB和SB根中GHA2的磷酸化及其与14-3-3蛋白的互作对铝胁迫的应答 | 第53-54页 |
| ·铝胁迫下RB和SB根质膜H~+-ATPase的活性与柠檬酸分泌的相关性 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| 第三章 铝胁迫下14-3-3蛋白和质膜H~+-ATPase的互作调控黑大豆柠檬酸分泌的作用 | 第56-69页 |
| ·材料和方法 | 第56-58页 |
| ·植物材料培养方法 | 第56页 |
| ·植物材料的处理及相对根伸长量的测定 | 第56-57页 |
| ·质膜的分离与纯化 | 第57页 |
| ·质膜纯度的检测和质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第57-58页 |
| ·Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP) | 第58页 |
| ·质膜H~+泵活性测定 | 第58页 |
| ·柠檬酸分泌量的测定 | 第58页 |
| ·根尖溴甲酚紫染色 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-67页 |
| ·铝胁迫下添加FC处理对SB根相对生长量的影响 | 第58-60页 |
| ·铝胁迫下添加5'-AMP对RB根相对生长量的影响 | 第60-63页 |
| ·铝胁迫下添加FC处理对SB根尖质膜H~+-ATPase与14-3-3蛋白的互作及其活性的影响 | 第63-64页 |
| ·铝胁迫下添加5'-AMP处理对RB根尖质膜H~+-ATPase与14-3-3蛋白的互作及其活性的影响 | 第64-65页 |
| ·铝胁迫下添加FC处理SB根尖质膜H~+泵活性和柠檬酸分泌量的影响 | 第65-66页 |
| ·铝胁迫下添加5'-AMP处理对RB根尖质膜H泵活性和柠檬酸分泌量的影响 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 野生型烟草14-3-3蛋白和质膜H~+-ATPase的表达与互作应答铝胁迫的机理分析 | 第69-81页 |
| ·材料与方法 | 第69-72页 |
| ·烟草的培养 | 第69页 |
| ·烟草的处理和相对根伸长量测定 | 第69-70页 |
| ·烟草根尖RNA的提取及RT-PCR分析 | 第70-71页 |
| ·烟草根尖质膜的分离与纯化 | 第71页 |
| ·烟草根尖质膜纯度的检测和质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第71页 |
| ·烟草根尖质膜Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP)分析 | 第71页 |
| ·烟草根尖柠檬酸分泌的测定 | 第71-72页 |
| ·烟草根尖H~+泵活性测定 | 第72页 |
| ·烟草根尖溴甲酚紫染色 | 第72页 |
| ·结果 | 第72-78页 |
| ·铝胁迫及激活剂或抑制剂处理对野生型烟草根相对生长量的影响 | 第72-73页 |
| ·铝胁迫处理对烟草不同亚型的14-3-3基因(Nt14-3-3)和质膜H~+-ATPase基因(pma)表达的影响 | 第73-75页 |
| ·铝胁迫处理后烟草根尖质膜H~+-ATPase的磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第75-76页 |
| ·激活剂FC或抑制剂AMP处理后烟草根尖质膜H~+-ATPase的磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第76-78页 |
| ·野生型烟草经不同处理后根尖H泵活性及H~+分泌量的变化 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 过量表达大豆SGF14a和抑制烟草14-3-3蛋白表达转基因烟草应答铝胁迫的机理分析 | 第81-104页 |
| ·实验材料和方法 | 第81-86页 |
| ·植物表达载体pK-35S-SGF14a的构建 | 第81-82页 |
| ·植物干扰表达载体pK-35S-Nt1433E-I-Nt1433E的构建 | 第82-83页 |
| ·烟草的转化及转基因烟草的筛选 | 第83页 |
| ·烟草基因组提取 | 第83-84页 |
| ·烟草RNA提取和RT-PCR分析 | 第84页 |
| ·转基因烟草的蛋白水平Western-blotting检测 | 第84页 |
| ·铝胁迫下烟草相对根生长量的测定 | 第84-85页 |
| ·烟草根中可溶性总蛋白、H_2O_2和MDA含量测定 | 第85页 |
| ·烟草根尖质膜的分离与纯化 | 第85页 |
| ·烟草根尖质膜纯度的检测和质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第85页 |
| ·烟草根尖质膜Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP) | 第85页 |
| ·烟草根尖柠檬酸分泌的测定 | 第85页 |
| ·烟草根尖H泵活性测定 | 第85页 |
| ·烟草根尖溴甲酚紫染色 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-99页 |
| ·过表达大豆14-3-3a基因(SGF14a)转基因烟草的鉴定 | 第86-87页 |
| ·过表达SGF14a转基因烟草在铝胁迫下RRG、可溶性蛋白、H_2O_2和MDA含量的变化 | 第87-89页 |
| ·过表达SGF14a转基因烟草在低磷红壤上生长表型的变化 | 第89页 |
| ·过表达SGF14a转基因烟草在铝胁迫下根尖质膜H~+-ATPase磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第89-92页 |
| ·过表达SGF14a转基因烟草经不同处理后根尖质膜H泵和H~+分泌量的变化 | 第92-93页 |
| ·抑制烟草14-3-3E基因表达的转基因烟草的鉴定 | 第93-94页 |
| ·抑制烟草14-3-3E基因表达的转基因烟草在铝胁迫下RRG、可溶性蛋白、H202和MDA含量的变化 | 第94-96页 |
| ·抑制烟草14-3-3E基因表达的转基因烟草在低磷红壤中生长表型的变化 | 第96页 |
| ·抑制烟草14-3-3E基因表达的转基因烟草在铝胁迫下根尖质膜H~+-ATPase磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第96-98页 |
| ·抑制烟草14-3-3E基因表达的转基因烟草经不同处理后根尖H泵和H~+分泌量的变化 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-104页 |
| ·超表达或干扰抑制表达14-3-3基因的转基因烟草耐铝能力变化 | 第99-102页 |
| ·转基因烟草根中质膜H~+-ATPase磷酸化及活性和柠檬酸分泌 | 第102-104页 |
| 第六章 过量表达△GHA2和抑制pma4基因表达转基因烟草应答的耐铝胁迫的机理分析 | 第104-123页 |
| ·材料与方法 | 第104-107页 |
| ·植物过表达载体pK-35S-△GHA2的构建 | 第104-105页 |
| ·植物干扰表达载体pK-35S-pma4-I-pma4的构建 | 第105-106页 |
| ·烟草的转化及转基因烟草的筛选 | 第106页 |
| ·烟草基因组提取 | 第106页 |
| ·烟草RNA提取和RT-PCR分析 | 第106页 |
| ·转基因烟草的蛋白水平Western-blotting检测 | 第106页 |
| ·铝胁迫下烟草相对根生长量的测定 | 第106页 |
| ·烟草根中可溶性总蛋白、H_2O_2和MDA含量测定 | 第106页 |
| ·烟草根尖质膜的分离与纯化 | 第106-107页 |
| ·烟草根尖质膜纯度的检测和质膜H~+-ATPase活性的测定 | 第107页 |
| ·烟草根尖质膜Western Blot和免疫共沉淀(CO-IP) | 第107页 |
| ·烟草根尖柠檬酸分泌的测定 | 第107页 |
| ·烟草根尖H泵活性测定 | 第107页 |
| ·烟草根尖溴甲酚紫染色 | 第107页 |
| ·结果 | 第107-119页 |
| ·过表达持续激活型质膜H~+-ATPase(△GHA2)基因的转基因烟草的鉴定 | 第107-108页 |
| ·过表达△GHA2转基因烟草在铝胁迫下RRG、可溶性蛋白、H_2O_2和MDA含量的变化 | 第108-109页 |
| ·过表达△GHA2转基因烟草在低磷红壤中生长表型的变化 | 第109-110页 |
| ·过表达△GHA2转基因烟草在铝胁迫下质膜H~+-ATPase磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第110-112页 |
| ·过表达△GHA2基因的转基因烟草在铝胁迫下根尖质膜H泵活性及H~+分泌量的变化 | 第112-113页 |
| ·烟草质膜H~+-ATPase(pma4)基因抑制表达的转基因烟草鉴定 | 第113-114页 |
| ·抑制烟草pma4基因表达的转基因烟草在铝胁迫下RRG、可溶性蛋白、H_2O_2和MDA含量的变化 | 第114-115页 |
| ·抑制烟草pma4基因表达的转基因烟草在低磷红壤中生长表型的变化 | 第115-116页 |
| ·抑制烟草pma4基因表达的转基因烟草在铝胁迫下根尖质膜H~+-ATPase磷酸化及其活性和柠檬酸分泌量的变化 | 第116-118页 |
| ·抑制烟草pma4基因表达的转基因烟草经不同处理后根尖H泵和H~+分泌量的变化 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-123页 |
| 第七章 总结与展望 | 第123-127页 |
| ·总结 | 第123-126页 |
| ·展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 攻读硕士期间发表论文及专利 | 第144页 |
