| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-21页 |
| 第一部分 丹参对氯沙坦药代动力学的影响 | 第21-93页 |
| 一、大鼠血浆中氯沙坦及其代谢物的HPLC-MS测定方法的建立 | 第21-41页 |
| (一) 仪器与试药 | 第21-22页 |
| 1、仪器 | 第21页 |
| 2、试药 | 第21-22页 |
| (二) 方法与结果 | 第22-39页 |
| 1、分析条件 | 第22页 |
| (1) 色谱条件 | 第22页 |
| (2) 质谱条件 | 第22页 |
| 2、标准溶液的配制 | 第22-23页 |
| (1) 氯沙坦标准溶液的配制 | 第22页 |
| (2) 代谢物EXP3174标准溶液的配制 | 第22页 |
| (3) 氯沙坦和代谢物EXP3174混合标准溶液的配制 | 第22-23页 |
| (4) 厄贝沙坦内标标准溶液的配制 | 第23页 |
| 3、血浆样品处理方法 | 第23页 |
| 4、血浆样品分析方法验证 | 第23-39页 |
| (1) 方法特异性 | 第23-24页 |
| (2) 标准曲线与线性范围 | 第24-26页 |
| (3) 定量限与检测限 | 第26-27页 |
| (4) 精密度实验 | 第27-32页 |
| (5) 准确度实验 | 第32-33页 |
| (6) 基质效应及提取回收率 | 第33-35页 |
| (7) 稳定性考察 | 第35-37页 |
| (8) 测定方法的质量控制 | 第37-39页 |
| (三) 讨论 | 第39-40页 |
| (四) 小结 | 第40-41页 |
| 二、单次给药大鼠氯沙坦片及与丹参片、丹参酮ⅡA、丹参多酚酸盐合用后氯沙坦的药代动力学研究 | 第41-68页 |
| (一) 仪器试药与试验方案 | 第41-42页 |
| 1、仪器 | 第41页 |
| 2、试药 | 第41页 |
| 3、实验动物 | 第41页 |
| 4、给药方案及取血 | 第41-42页 |
| 5、血浆样品预处理与分析 | 第42页 |
| 6、数据处理 | 第42页 |
| (二) 实验结果 | 第42-64页 |
| 1、单次给药大鼠氯沙坦片后氯沙坦和代谢物EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第42-47页 |
| (1) 单次给药大鼠氯沙坦片后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第42-44页 |
| (2) 单次给药大鼠氯沙坦片后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第44-45页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第45-47页 |
| 2、单次给药大鼠氯沙坦片与丹参片后的血药浓度-时间数据 | 第47-51页 |
| (1) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参片后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第47-48页 |
| (2) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参片后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第48-50页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第50-51页 |
| 3、单次给药大鼠氯沙坦片与丹参酮IIA后的血药浓度-时间数据 | 第51-56页 |
| (1) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参酮ⅡA后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第51-53页 |
| (2) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参酮ⅡA后EXP3174的血药浓度时间数据 | 第53-55页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第55-56页 |
| 4、单给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后的血药浓度-时间数据 | 第56-61页 |
| (1) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后氯沙坦的血药浓度时间数据 | 第56-58页 |
| (2) 单次给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第58-59页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第59-61页 |
| 5、结果比较 | 第61-64页 |
| (1) 氯沙坦的血药浓度-时间曲线及药代动力学参数 | 第61-62页 |
| (2) EXP3174的血药浓度-时间曲线及药代动力学参数 | 第62-64页 |
| (三) 讨论 | 第64-67页 |
| (四) 小结 | 第67-68页 |
| 三、长期给药大鼠氯沙坦片及与丹参片、丹参酮ⅡA、丹参多酚酸盐合用后氯沙坦的药代动力学研究 | 第68-93页 |
| (一) 仪器试药及试验方案 | 第68-69页 |
| 1、仪器 | 第68页 |
| 2、试药 | 第68页 |
| 3、实验动物 | 第68页 |
| 4、给药方案及取血 | 第68-69页 |
| 5、血浆样品预处理与分析 | 第69页 |
| 6、数据处理 | 第69页 |
| (二) 实验结果 | 第69-90页 |
| 1、长期给药大鼠氯沙坦片后氯沙坦和代谢物EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第69-74页 |
| (1) 长期给药大鼠氯沙坦片后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第69-71页 |
| (2) 长期给药大鼠氯沙坦片后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第71-72页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第72-74页 |
| 2、长期给药大鼠氯沙坦片与丹参片后的血药浓度-时间数据 | 第74-78页 |
| (1) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参片后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第74-75页 |
| (2) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参片后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第75-77页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第77-78页 |
| 3、长期给药大鼠氯沙坦片与丹参酮ⅡA后的血药浓度-时间数据 | 第78-83页 |
| (1) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参酮ⅡA后氯沙坦的血药浓度-时间数据 | 第78-80页 |
| (2) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参酮ⅡA后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第80-81页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第81-83页 |
| 4、长期给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后的血药浓度-时间数据 | 第83-87页 |
| (1) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后氯沙坦的血药浓度时间数据 | 第83-84页 |
| (2) 长期给药大鼠氯沙坦片与丹参多酚酸盐后EXP3174的血药浓度-时间数据 | 第84-86页 |
| (3) 药代动力学参数 | 第86-87页 |
| 5、结果比较 | 第87-90页 |
| (1) 氯沙坦的血药浓度-时间曲线及药代动力学参数 | 第87-88页 |
| (2) EXP3174的血药浓度-时间曲线及药代动力学参数 | 第88-90页 |
| (三) 讨论 | 第90-92页 |
| (四) 小结 | 第92-93页 |
| 第二部分 丹参活性成分对介导氯沙坦代谢的细胞色素P450酶的影响 | 第93-124页 |
| (一) 材料和试剂 | 第96-98页 |
| 1、主要材料 | 第96页 |
| 2、主要试剂 | 第96-97页 |
| 3、主要仪器 | 第97-98页 |
| (二) 方法 | 第98-109页 |
| 1、Chang Liver细胞的体外培养、复苏、传代及冻存 | 第98-101页 |
| (1) 溶液配制 | 第98页 |
| (2) 细胞复苏 | 第98-99页 |
| (3) 细胞计数 | 第99-100页 |
| (4) 细胞培养 | 第100页 |
| (5) 细胞传代 | 第100页 |
| (6) 细胞冻存 | 第100-101页 |
| 2、MTT法检测不同浓度丹酚酸B和丹参酮ⅡA对Chang liver细胞增殖的影响 | 第101-102页 |
| 3、半定量RT-PCR检测CYP2C9和CYP3A4的表达水平 | 第102-105页 |
| (1) RNA提取相关试剂的配制 | 第102-103页 |
| (2) 提取细胞总RNA | 第103页 |
| (3) RNA的定量 | 第103页 |
| (4) 逆转录合成cDNA | 第103-105页 |
| (5) PCR产物电泳分析 | 第105页 |
| 4、Western Blot检测CYP2C9和CYP3A4蛋白的表达水平 | 第105-109页 |
| (1) 收集细胞提取蛋白 | 第105-106页 |
| (2) 核蛋白、质蛋白的保存 | 第106页 |
| (3) 试剂配制及蛋白质分子量标准(Marker) | 第106-107页 |
| (4) SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳 | 第107-108页 |
| (5) 转移 | 第108页 |
| (6) 染色 | 第108页 |
| (7) 封闭、孵育一抗 | 第108-109页 |
| (8) 洗膜,孵育二抗、洗涤 | 第109页 |
| (9) 显色曝光及分析结果 | 第109页 |
| 5、统计学方法 | 第109页 |
| (三) 结果 | 第109-121页 |
| 1、MTT法检测丹酚酸B对Chang Liver细胞增殖的影响 | 第109-110页 |
| 2、MTT法检测丹参酮ⅡA对Chang Liver细胞增殖的影响 | 第110-111页 |
| 3、RT-PCR检测CYP3A4和CYP2C9mRNA的表达结果 | 第111-116页 |
| (1) 丹酚酸B对Chang Liver细胞的mRNA表达的影响 | 第111页 |
| (2) 丹参酮Ⅱ A对Chang Liver细胞的mRNA表达的影响 | 第111-116页 |
| 4、western blot检测CYP3A4和CYP2C9蛋白的表达结果 | 第116-121页 |
| (1) 丹酚酸B对Chang Liver细胞的蛋白表达的影响 | 第116页 |
| (2) 丹参酮ⅡA对Chang Liver细胞的蛋白表达的影响 | 第116-121页 |
| (四) 讨论 | 第121-123页 |
| (五) 小结 | 第123-124页 |
| 结论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-131页 |
| 在读期间发表文章 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
