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狂犬病病毒主要结构蛋白单克隆抗体的制备及血清抗体检测方法的建立

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 绪论第13-26页
   ·狂犬病流行病学第13-16页
   ·狂犬病病毒第16-19页
     ·狂犬病病毒的分类第16-18页
     ·狂犬病病毒的分子生物学第18-19页
   ·单克隆抗体在狂犬病研究中的应用第19-20页
   ·狂犬病诊断方法的研究进展第20-25页
     ·狂犬病病毒抗原诊断技术第21-22页
     ·狂犬病病毒核酸诊断技术第22-23页
     ·抗体检测技术第23-25页
   ·本研究的目的和意义第25-26页
第二章 狂犬病病毒主要结构蛋白单克隆抗体的制备第26-41页
   ·实验材料第26-29页
     ·实验动物、细胞、菌株及毒株第26页
     ·主要试剂第26页
     ·主要实验器材第26-27页
     ·主要溶液及其配方第27-29页
   ·实验方法第29-35页
     ·免疫原的制备及筛选方法的建立第29页
     ·制备脾细胞用 BALB/c 小鼠的免疫程序第29-30页
     ·免疫小鼠血清抗体效价的测定第30页
     ·杂交瘤细胞株的建立第30-32页
     ·融合细胞的选择性培养和单克隆抗体筛选检测第32页
     ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法)第32-33页
     ·杂交瘤细胞的冻存与复苏第33页
     ·单克隆抗体的鉴定第33-34页
     ·杂交瘤细胞的抗体分泌稳定性检测第34-35页
     ·单克隆抗体的大量制备第35页
   ·实验结果第35-40页
     ·免疫小鼠的血清抗体效价测定第35页
     ·杂交瘤细胞株的建立第35-36页
     ·单克隆抗体的亚类鉴定第36页
     ·单克隆抗体的抗原结合特性分析第36-37页
     ·单克隆抗体的间接免疫荧光分析第37页
     ·单克隆抗体的核型分析第37-38页
     ·单克隆抗体腹水效价的测定及其纯化第38-40页
     ·杂交瘤细胞的抗体分泌稳定性检测第40页
   ·讨论第40-41页
第三章 狂犬病病毒糖蛋白(G)单克隆抗体的抗原表位分析第41-54页
   ·材料与方法第41-48页
     ·实验材料第41-43页
     ·实验方法第43-48页
   ·实验结果第48-52页
     ·病毒体外扩增结果第48页
     ·G 基因亚克隆片段的 PCR 结果第48-49页
     ·重组表达质粒双酶切鉴定结果第49-50页
     ·亚克隆片段的诱导表达第50页
     ·重组蛋白的 Western Blot 鉴定第50-51页
     ·6B10 株单克隆抗体抗原表位分析第51-52页
   ·讨论第52-54页
第四章 狂犬病病毒基质蛋白(M)的原核表达及 ELISA 检测方法的建立第54-65页
   ·材料与方法第54-59页
     ·病毒和血清样品第54页
     ·菌种、载体及试剂第54页
     ·主要溶液的配制第54-56页
     ·引物设计与合成第56页
     ·RV LEP-Flury 株 M 基因的扩增、克隆及测序第56-57页
     ·重组表达质粒在大肠杆菌中的表达与鉴定第57-58页
     ·间接 ELISA 检测方法的建立第58页
     ·以 M 蛋白作为包被抗原建立的间接 ELISA 检测方法与以 P 蛋白作为包被抗原的间接 ELISA 检测方法进行比较第58-59页
   ·实验结果第59-63页
     ·RV M 基因的扩增、克隆及测序第59-60页
     ·重组表达质粒在大肠杆菌中的表达与鉴定第60-63页
     ·间接 ELISA 检测方法的初步建立第63页
     ·以 M 蛋白作为包被抗原建立的间接 ELISA 检测方法与以 P 蛋白作为包被抗原的间接 ELISA 检测方法进行比较第63页
   ·讨论第63-65页
第五章 全文结论第65-66页
参考文献第66-70页
致谢第70-71页
作者简历第71页

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