| 附件 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| ·烟草香气物质及其影响因素 | 第15-16页 |
| ·烟草香气物质 | 第15页 |
| ·烟草香气物质的影响因素 | 第15-16页 |
| ·烟草香气前体物质-黄酮类物质和萜烯类物质生物合成途径 | 第16-20页 |
| ·黄酮类物质和萜烯类物质生物合成研究进展 | 第16-18页 |
| ·黄酮类物质简介 | 第16-17页 |
| ·萜烯类物质简介 | 第17-18页 |
| ·黄酮类代谢途径中查尔酮合成酶（CHS）基因及其功能研究进展 | 第18-19页 |
| ·CHS 基因与植物花色 | 第18-19页 |
| ·CHS 基因与植物雄性不育 | 第19页 |
| ·CHS 基因与植物防御 | 第19页 |
| ·萜烯类代谢途径中 1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(DXS)基因研究进展 | 第19-20页 |
| ·DXS 酶活性检测 | 第19-20页 |
| ·DXS 基因的表达特异性 | 第20页 |
| ·DXS 的亚细胞定位 | 第20页 |
| ·根癌农杆菌介导的瞬时表达法概述 | 第20-23页 |
| ·瞬时表达的原理与方法 | 第20-21页 |
| ·瞬时表达的技术要点 | 第21-22页 |
| ·Agroinfiltration 在植物分子生物学领域的运用 | 第22-23页 |
| ·Agroinfiltration 与基因沉默 | 第22页 |
| ·外源基因在转基因植株体内的表达 | 第22-23页 |
| ·植物启动子和转录因子分析 | 第23页 |
| ·植物基因的亚细胞定位 | 第23页 |
| ·本研究的目的意义、主要内容和技术路线 | 第23-25页 |
| ·研究的目的意义 | 第23-24页 |
| ·研究的主要内容 | 第24页 |
| ·研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 烟草香气相关基因 DXS 基因的分离定位 | 第25-32页 |
| ·材料与方法 | 第25-28页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·植物材料和菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·烟草叶片总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第26页 |
| ·烟草 DXS 基因特异性引物设计 | 第26页 |
| ·烟草 DXS 基因的克隆和中间载体的构建 | 第26-27页 |
| ·烟草 DXS 基因亚细胞定位载体的构建及农杆菌转化 | 第27页 |
| ·根瘤农杆菌介导瞬时转化法(FAST)转化本氏烟 | 第27-28页 |
| ·转基因烟草幼苗的激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·RNA 纯度检测 | 第28-29页 |
| ·烟草 DXS 基因的克隆和中间载体的构建 | 第29页 |
| ·烟草 DXS 基因亚细胞定位载体的构建和鉴定 | 第29-30页 |
| ·转入 DXS 基因定位载体的农杆菌转化及鉴定 | 第30页 |
| ·转基因烟草幼苗的激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 DXS 基因表达载体的构建及其遗传转化 | 第32-40页 |
| ·材料与方法 | 第32-36页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·植物材料和菌株 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·烟草 DXS 基因的克隆和中间载体的构建 | 第32-33页 |
| ·DXS 基因干扰载体的构建及农杆菌转化 | 第33-34页 |
| ·DXS 基因干扰载体的遗传转化 | 第34页 |
| ·转 DXS 基因烟草植株的检测 | 第34-35页 |
| ·转 DXS 基因烟草生理生化特性的分析鉴定 | 第35-36页 |
| ·转基因烟草生长状况分析 | 第35-36页 |
| ·转基因烟草色素含量测定 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·烟草 DXS 基因干扰片段的扩增 | 第36页 |
| ·烟草 DXS 基因 RNAi 干扰载体的检测 | 第36-37页 |
| ·DXS 基因干扰载体的的农杆菌转化 | 第37页 |
| ·转 DXS 基因烟草植株的检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的 RT-PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·转 DXS 基因植株的形态特征与生长情况 | 第38-39页 |
| ·转 DXS 基因植株色素含量的测定 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 CHS 基因表达载体的构建及其遗传转化 | 第40-53页 |
| ·材料与方法 | 第40-44页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·植物材料和菌株 | 第40页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·CHS 基因过量表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·烟草 CHS 基因的克隆和中间载体的构建 | 第40-41页 |
| ·烟草 CHS 基因过量表达植物载体 PBI-CHS 的构建 | 第41页 |
| ·CHS 基因干扰表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·CHS 基因干扰引物的设计 | 第41页 |
| ·烟草 CHS 基因干扰片段的克隆 | 第41-42页 |
| ·烟草 CHS 基因 RNAi 载体的构建 | 第42页 |
| ·烟草 CHS 基因过量表达载体和 RNAi 载体的遗传转化 | 第42页 |
| ·CHS 基因的转基因植株 GUS 染色分析和 PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·转基因烟草 CHS 基因的表达水平检测 | 第42-43页 |
| ·转 CHS 基因烟草生理生化特性的分析鉴定 | 第43-44页 |
| ·转基因烟草生长状况分析 | 第43-44页 |
| ·肉桂酸-4-羟化酶（C4H）和对香豆酸辅酶 A 连接酶（4CL）活性测定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·CHS 基因目的片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·CHS 基因过表达目的基因的扩增和中间载体的构建 | 第44-45页 |
| ·CHS 基因干扰片段的扩增 | 第45页 |
| ·过量表达植物载体 PBI-CHS 的鉴定 | 第45-46页 |
| ·CHS 基因的 RNAi 干扰载体的检测 | 第46-47页 |
| ·入门载体的检测 | 第46页 |
| ·RNAi 表达载体的检测 | 第46-47页 |
| ·CHS 基因表达载体的农杆菌转化 | 第47-48页 |
| ·CHS 基因过量表达载体的农杆菌转化 | 第47页 |
| ·CHS 基因干扰载体的农杆菌转化 | 第47-48页 |
| ·转 CHS 基因烟草植株的分子鉴定 | 第48-50页 |
| ·转 CHS 基因过量表达载体植株的鉴定 | 第48页 |
| ·转 CHS 基因干扰表达载体植株的鉴定 | 第48-49页 |
| ·烟草 CHS 基因的相对表达分析 | 第49-50页 |
| ·转基因植株的生长发育状况 | 第50页 |
| ·4CL 和 C4H 酶活性分析 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 转 CHS 基因植株多酚物质含量的测定 | 第53-58页 |
| ·材料与方法 | 第53-54页 |
| ·试验材料 | 第53页 |
| ·供试材料 | 第53页 |
| ·试验试剂 | 第53页 |
| ·试验仪器 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草多酚的 HPLC 测定 | 第53-54页 |
| ·制备标准曲线 | 第53页 |
| ·样品的制备和测定 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-57页 |
| ·超声波提取条件的优化 | 第54-55页 |
| ·提取温度对烟叶中多酚物质提取的影响 | 第54页 |
| ·不同提取时间对烟叶多酚物质提取的影响 | 第54-55页 |
| ·CHS 基因对烤烟烟叶中多酚类物质的影响 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 全文结论 | 第58-60页 |
| ·DXS 基因的分离定位 | 第58页 |
| ·DXS 基因表达载体的构建及其遗传转化 | 第58页 |
| ·CHS 基因表达载体的构建及其遗传转化 | 第58-59页 |
| ·利用高效液相色谱（HPLC）技术定量分析转 CHS 基因烟草中多酚物质含量 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
