| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 1 猪圆环病毒的一般生物学特征 | 第14-15页 |
| ·病毒分类学地位 | 第14页 |
| ·病毒的形态及理化特征 | 第14-15页 |
| 2 猪圆环病毒的分子生物学特征 | 第15-17页 |
| ·病毒复制与转录研究 | 第15-16页 |
| ·编码蛋白的研究 | 第16-17页 |
| 3 PCV 2 检测与分析技术 | 第17-19页 |
| ·间接免疫荧光技术（IFA） | 第17-18页 |
| ·Real-time PCR 技术 | 第18页 |
| ·病毒突变研究 | 第18页 |
| ·RACE 技术 | 第18-19页 |
| 4 细胞凋亡检测常用方法 | 第19-21页 |
| ·形态学检测 | 第19页 |
| ·生物化学特征检测 | 第19页 |
| ·凋亡相关 caspase 家族蛋白检测 | 第19-20页 |
| ·流式细胞术检测 | 第20-21页 |
| 第二章 猪圆环病毒II型ORF4表达缺失株的构建及检测 | 第21-41页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| ·病毒、细胞和载体 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-31页 |
| ·序列分析及引物设计 | 第21-22页 |
| ·构建 PCV2 突变体质粒 | 第22-25页 |
| ·病毒双链裸 DNA 的获得 | 第25-26页 |
| ·重组与突变 PCV2 的获得 | 第26-27页 |
| ·病毒的检测与扩繁 | 第27-31页 |
| 3 结果分析 | 第31-39页 |
| ·突变位点选择 | 第31-32页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·序列测序结果比对分析 | 第33-35页 |
| ·自环化产物的 PCR 检测 | 第35页 |
| ·病毒体外感染稳定性检测 | 第35-37页 |
| ·病毒 ORF2 RNA 剪接检测 | 第37-38页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 荧光定量PCR检测病毒滴度及mRNA表达体系的建立 | 第41-48页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| ·PCV2 阳性标准品 | 第41页 |
| ·试剂与仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·标准品的制备 | 第42页 |
| ·普通 PCR 反应检测 | 第42-43页 |
| ·荧光定量体系建立及优化 | 第43页 |
| ·标准曲线的建立及评价 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·标准品分析 | 第44页 |
| ·普通 PCR 反应检测及荧光体系建立 | 第44页 |
| ·ORF1 基因荧光定量标准曲线分析 | 第44-45页 |
| ·ORF3+4 基因荧光定量标准曲线分析 | 第45-46页 |
| ·ORF3 基因荧光定量标准曲线分析 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 病毒体外复制生长及其mRNA表达量检测 | 第48-54页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| ·细胞与病毒 | 第48页 |
| ·试剂与仪器 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-50页 |
| ·病毒 DNA 提取及定量 | 第48-49页 |
| ·病毒感染及样品收集制备 | 第49-50页 |
| ·各病毒体外复制生长检测 | 第50页 |
| ·各病毒 mRNA 表达量检测 | 第50页 |
| 3 结果分析 | 第50-53页 |
| ·病毒体外复制能力检测 | 第50-51页 |
| ·病毒 mRNA 表达量检测 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 病毒介导细胞凋亡的研究 | 第54-58页 |
| 1 实验材料 | 第54页 |
| ·细胞和病毒 | 第54页 |
| ·试剂和仪器 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-55页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·病毒接种 | 第54页 |
| ·病毒引起的细胞凋亡分析(Caspase 检测) | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-57页 |
| ·Caspase 家族蛋白活性分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第六章 猪圆环病毒II型ORF4基因mRNA 5'鉴定 | 第58-66页 |
| 1 材料 | 第58页 |
| ·RNA 样本 | 第58页 |
| ·酶与试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| ·引物序列 | 第58-59页 |
| ·第一链 cDNA 合成 | 第59页 |
| ·cDNATdT 末端加尾 | 第59-60页 |
| ·PCR 扩增 ORF45'端 | 第60-61页 |
| ·5' RACE 序列分析 | 第61页 |
| ·全长 mRNAPCR 检测 | 第61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·5' RACE PCR 扩增结果 | 第61-62页 |
| ·5'末端测序分析 | 第62-63页 |
| ·5'端位置与 3'加尾位点对应关系检测 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间发表（投稿）的论文 | 第72页 |
