| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 论文综述 | 第12-21页 |
| 第一章 免疫抑制因子 MNSFβ的研究进展 | 第12-21页 |
| ·MNSFβ的发现与基本特点 | 第12页 |
| ·MNSFβ结构域的功能 | 第12-15页 |
| ·MNSFβ的泛素样结构域 | 第12-13页 |
| ·MNSFβ尾端的核糖体蛋白 S30 | 第13-15页 |
| ·MNSFβ参与介导 ERK/MAPK 信号通路 | 第15-16页 |
| ·EKR/ MAPK 信号通路 | 第15页 |
| ·MNSFβ-BCL-G 复合物介导 ERK/MAPK 信号通路 | 第15-16页 |
| ·MNSFβ参与介导 Toll 样受体信号通路 | 第16-18页 |
| ·Toll 样受体 | 第16-17页 |
| ·MNSFβ复合物参与介导 TLR 信号通路 | 第17-18页 |
| ·MNSFβ与胚胎着床 | 第18-19页 |
| ·MNSFβ蛋白的广泛表达 | 第19-21页 |
| 实验部分 | 第21-52页 |
| 第二章 猪 MNSFβ的克隆与生物信息学分析 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·样品来源 | 第21页 |
| ·质粒和 DH-5α工程菌来源 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·实验设备 | 第21-22页 |
| ·分子生物学分析软件和数据库 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-26页 |
| ·电子克隆猪 MNSFβ | 第22页 |
| ·分子克隆猪 MNSFβ | 第22-24页 |
| ·重组质粒 pMD-MNSFβ 菌液 PCR 鉴定和测序 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-30页 |
| ·电子克隆猪 MNSFβ结果 | 第26页 |
| ·猪 MNSFβ PCR 产物电泳结果 | 第26页 |
| ·重组质粒 pMD-MNSFβ菌液 PCR 结果 | 第26-27页 |
| ·pMD-MNSFβ测序结果分析 | 第27页 |
| ·猪 MNSFβ蛋白理化性质分析 | 第27-28页 |
| ·猪 MNSFβ二级结构与保守结构域分析 | 第28页 |
| ·猪 MNSFβ外显子及亚细胞定位的预测结果 | 第28页 |
| ·猪 MNSFβ与其它物种相似性分析结果 | 第28-29页 |
| ·MNSFβ无根进化树分析 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 猪 MNSFβ的组织分布 | 第32-36页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·组织来源 | 第32页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-33页 |
| ·RNA 提取 | 第32页 |
| ·反转录 | 第32页 |
| ·实时荧光定量 PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-34页 |
| ·PCR 检测实时荧光定量引物的特异性 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测猪 MNSFβ在各组织的相对表达量 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第四章 猪 MNSFβ在 SUVEC 中的表达 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·载体、细胞和菌种 | 第36页 |
| ·酶和试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·构建 pEGFP-MNSFβ真核表达载体 | 第36-39页 |
| ·细胞培养和质粒转染 | 第39页 |
| ·Western blot 检测外源目的蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·Hochesst3342 染色后观察转染后 36 h 后目的蛋白的细胞定位 | 第40页 |
| ·新霉素（G418）最佳筛选浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·用最佳筛选浓度的 G418 筛选转染的细胞 | 第41页 |
| ·挑选稳定表达 EGFP-MNSFβ的细胞株 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·重组质粒 pEGFP-MNSFβ双酶切鉴定和测序结果 | 第41-42页 |
| ·pEGFP-MNSFβ质粒浓度检测结果 | 第42页 |
| ·重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞绿色荧光观察 | 第42页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第42页 |
| ·Hochesst3342 染色后观察 MNSFβ的亚细胞定位 | 第42-43页 |
| ·G418 筛选表达 EGFP-MNSFβ的细胞株 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第五章 猪 MNSFβ的原核表达与蛋白纯化 | 第46-52页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂和酶 | 第46页 |
| ·工程菌和质粒 | 第46页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·pET-MNSFβ重组质粒的构建与鉴定 | 第46-48页 |
| ·pET-MNSFβ重组质粒转化表达菌 BL21 及鉴定 | 第48页 |
| ·IPTG 诱导 pET-MNSFβ重组质粒在 BL21 中表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 检测融合蛋白 His-MNSFβ表达 | 第48页 |
| ·western blot 检测融合蛋白 His-MNSFβ表达 | 第48页 |
| ·融合蛋白 His-MNSFβ切胶纯化 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-51页 |
| ·重组质粒 pET-MNSFβ酶切鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·IPTG 诱导 His-MNSFβ融合蛋白表达 SDS-PAGE 分析结果 | 第49页 |
| ·western blot 鉴定检测融合蛋白 His-MNSFβ表达 | 第49-50页 |
| ·His-MNSFβ融合蛋白纯化后 SDS-PAGE 分析结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 缩略词 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64页 |
