| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 绪言 | 第13-32页 |
| ·NO_3~-胁迫对设施农作物生长的影响 | 第13-17页 |
| ·土壤次生盐渍化原因及主要成分 | 第13-14页 |
| ·施肥对土壤次生盐渍化的影响 | 第14-15页 |
| ·硝酸盐对植物形态的影响 | 第15-17页 |
| ·植物体内积累NO_3~-的机理及因素 | 第17-18页 |
| ·植物耐盐胁迫的机理 | 第18-22页 |
| ·体内离子的调控 | 第19页 |
| ·植物激素的调控 | 第19-20页 |
| ·氧化系统的调控 | 第20-21页 |
| ·渗透物质的调控 | 第21页 |
| ·逆境胁迫的信号途径 | 第21-22页 |
| ·植物耐盐基因的研究进展 | 第22-25页 |
| ·14-3-3蛋白的研究进展 | 第25-31页 |
| ·14-3-3 蛋白的分类及结构 | 第25-27页 |
| ·14-3-3 蛋白的功能 | 第27-31页 |
| ·14-3-3蛋白提高H~+-ATPase的活性 | 第27-28页 |
| ·14-3-3蛋白调控硝酸还原酶(NR)的活性 | 第28-29页 |
| ·14-3-3 蛋白调节谷氨酰胺合成酶(GS)的活性 | 第29页 |
| ·14-3-3蛋白的细胞定位及对转录的调控 | 第29-30页 |
| ·14-3-3蛋白参与植物抗逆性和病原体的抗性 | 第30-31页 |
| ·研究的目的及意义 | 第31-32页 |
| 第二章 菠菜14-3-3蛋白基因的克隆、原核表达及抗体制备 | 第32-44页 |
| ·材料和方法 | 第33-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·酶与试剂 | 第33页 |
| ·植物材料培养 | 第33页 |
| ·植物总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·植物总RNA纯化 | 第34页 |
| ·引物合成RACE法扩增So14-3-3-5'端 | 第34页 |
| ·PCR扩增So14-3-3基因 | 第34-35页 |
| ·DNA片段回收 | 第35页 |
| ·TA克隆 | 第35页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第36-37页 |
| ·抗体的制备 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·RACE法扩增So14-3-3-5'端 | 第38页 |
| ·菠菜14-3-3蛋白基因的序列分析 | 第38-41页 |
| ·pGEX-So14-3-3原核表达载体构建 | 第41页 |
| ·So14-3-3重组蛋白表达及条件的优化 | 第41-42页 |
| ·pGEX4T-So14-3-3重组蛋白的纯化及抗体的制备 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 菠菜14-3-3蛋白应答高NO_3~-胁迫的机理分析 | 第44-58页 |
| ·材料和方法 | 第45-49页 |
| ·材料处理 | 第45页 |
| ·RT-PCR和Western blot | 第45-46页 |
| ·NR活性的测定 | 第46页 |
| ·H~+-ATPase活性的测定 | 第46页 |
| ·GS1活性的测定 | 第46-47页 |
| ·免疫共沉淀(CO-IP) | 第47页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·农杆菌侵染法转化烟草 | 第48页 |
| ·转基因烟草基因组PCR、RT-PCR和Western blot检测 | 第48页 |
| ·高NO_3~-胁迫下转基因烟草根的相对生长量 | 第48页 |
| ·高NO_3~胁迫下转基因烟草丙二醛(MDA)、过氧化氢(H202)和羰基化蛋白(PC)含量测定 | 第48-49页 |
| ·高NO_3~-胁迫下转基因烟草可溶性糖和总蛋白含量测定 | 第49页 |
| ·数据统计分析 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·So14-3-3在高NO_3~-胁迫下的表达分析 | 第50页 |
| ·NO_3~-胁迫下H~+-ATPase、NR和GS1基因表达、活性及与So14-3-3互作分析 | 第50-51页 |
| ·NO_3~-胁迫下与So14-3-3蛋白互作的其它蛋白 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草基因组PCR、RT-PCR和Western blot检测 | 第52-53页 |
| ·高NO_3~-胁迫下转基因烟草根的相对生长量 | 第53页 |
| ·高NO_3~-胁迫下转基因烟草过氧化氢(H_2O_2)、丙二醛(MDA)和羰基化蛋白(PC)含量 | 第53-54页 |
| ·高NO_3~-胁迫下转基因烟草可溶性糖和可溶性蛋白的含量 | 第54页 |
| ·转基因烟草中So14-3-3作用机理分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-76页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表的论文 | 第76页 |
