| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 第一部分 钩端螺旋体groEL基因原核表达 | 第10-30页 |
| 一、材料与方法 | 第10-23页 |
| (一) 实验材料 | 第10-13页 |
| 1. 实验菌株 | 第10页 |
| 2. 实验质粒 | 第10页 |
| 3. 实验培养基 | 第10-11页 |
| 4. 实验试剂 | 第11-12页 |
| 5. 实验仪器 | 第12-13页 |
| (二) 实验方法 | 第13-23页 |
| 1. 问号钩体的培养 | 第13页 |
| 2. 问号钩体基因组DNA提取 | 第13-14页 |
| 3. 大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第14-15页 |
| 4. 问号钩体groEL基因的PCR扩增 | 第15页 |
| 5. PCR扩增产物电泳 | 第15-16页 |
| 6. PCR扩增片段的纯化 | 第16页 |
| 7. 目的基因与pMD-19T的连接(T-A克隆) | 第16页 |
| 8. 连接产物的转化 | 第16-17页 |
| 9. 质粒pMD19-T~(groEL)的提取 | 第17-18页 |
| 10. 质粒pMD19-T~(groEL)的酶切鉴定 | 第18页 |
| 11. 插入的目的基因DNA片段序列测定 | 第18页 |
| 12. groEL基因原核表达体系的建立 | 第18-21页 |
| 13. 融合蛋白的表达 | 第21-23页 |
| 14. 融合蛋白的纯化 | 第23页 |
| 二、结果 | 第23-28页 |
| (一) 钩端螺旋体groEL基因克隆结果 | 第23-25页 |
| 1. 所提问号钩体基因组DNA的纯度 | 第23页 |
| 2. groEL基因的扩增与克隆载体构建 | 第23-24页 |
| 3. 克隆基因的序列测定 | 第24-25页 |
| (二) 钩端螺旋体rGroEL的表达与纯化 | 第25-28页 |
| 1. groEL基因原核表达载体的构建 | 第25页 |
| 2. 扩增产物分析 | 第25-26页 |
| 3. groEL基因的原核表达 | 第26-27页 |
| 4. 重组蛋白rGroEL的纯化 | 第27页 |
| 5. 重组蛋白rGroEL的含量测定 | 第27-28页 |
| 三、分析与讨论 | 第28-29页 |
| 四、小结 | 第29-30页 |
| 第二部分 重组蛋白rGroEL的免疫保护作用研究 | 第30-37页 |
| 一、材料与方法 | 第30-34页 |
| (一) 实验材料 | 第30-32页 |
| 1. 实验菌株与实验动物 | 第30页 |
| 2. 实验培养基 | 第30页 |
| 3. 实验仪器 | 第30-31页 |
| 4. 实验试剂 | 第31-32页 |
| (二) 方法 | 第32-34页 |
| 1. 问号钩体的培养 | 第32页 |
| 2. 抗血清制备及鉴定 | 第32-33页 |
| 3. 金地鼠保护试验 | 第33-34页 |
| 4. 显微镜凝集试验(MAT) | 第34页 |
| 二、试验结果 | 第34-35页 |
| 1. 抗血清的制备及鉴定 | 第34页 |
| 2. rGroEL免疫保护效果 | 第34-35页 |
| 3. MAT效价 | 第35页 |
| 三、分析与讨论 | 第35-36页 |
| 四、小结 | 第36-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 文献综述 | 第42-48页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
