| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-37页 |
| ·DNA损伤与修复 | 第10-11页 |
| ·DNA双链断裂的修复机制 | 第11-13页 |
| ·单链退火修复 | 第13-15页 |
| ·核酸酶负责加工复制和修复过程中产生的DNA中间产物 | 第15-32页 |
| ·Dna2在冈崎片段成熟过程中的作用 | 第16-20页 |
| ·Exo1和STR-Dna2-RPA在DNA扩展剪切过程中的作用 | 第20-25页 |
| ·Rad1-Rad10在核苷酸切除修复和单链退火修复等过程中的作用. | 第25-27页 |
| ·Slx1-Slx4在维持基因组稳定性中的作用 | 第27-30页 |
| ·Mus81-Mms4/EME1在停滞复制叉的修复中的作用 | 第30-32页 |
| ·核酸酶的调控在维持基因组稳定性中的作用 | 第32-34页 |
| ·磷酸化/去磷酸化对MUS81-EME1和YEN1活性的调控 | 第32页 |
| ·RPA以及Dna2的磷酸化对Dna活性和招募的调控 | 第32-34页 |
| ·蛋白降解途径对Exo1的调控 | 第34页 |
| ·研究的目的与意义 | 第34-37页 |
| 第二章 研究材料与方法 | 第37-54页 |
| ·仪器与试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基与溶液 | 第38-39页 |
| ·菌株 | 第39-40页 |
| ·常规操作与方法 | 第40-54页 |
| ·随机孢子分析和四分子分析 | 第40-41页 |
| ·裂殖酵母转化 | 第41-42页 |
| ·菌落PCR | 第42页 |
| ·细胞同步化 | 第42页 |
| ·显微镜观察蛋白在双链断裂损伤(DSB)位点定位 | 第42-43页 |
| ·DNA损伤处理敏感性实验 | 第43-44页 |
| ·3’非同源单链的检测 | 第44-45页 |
| ·碘蒸气染色 | 第45页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第45-46页 |
| ·蛋白质印迹杂交 | 第46-47页 |
| ·细胞内免疫共沉淀 | 第47-48页 |
| ·裂殖酵母中过表达蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·大肠杆菌中蛋白的重组表达 | 第48-49页 |
| ·酶活底物DNA的制备 | 第49-50页 |
| ·细胞内源Rad16-Swi10的酶活检测 | 第50-51页 |
| ·过表达纯化的Rad16-Swi10的酶活检测 | 第51-52页 |
| ·过表达纯化的Dna2-Cdc24的酶活检测 | 第52页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第52-54页 |
| 第三章 研究结果 | 第54-95页 |
| ·Dsn1介导Rad16-Swi10-Saw1和Dna2-Cdc24形成DSN复合体 | 第54-59页 |
| ·Dsn1和Saw1是Rad16-Swi10和Dna2-Cdc24的结合因子 | 第54-55页 |
| ·Dsn1介导Rad16-Swi10-Saw1和Dna2-Cdc24之间的相互作用 | 第55-57页 |
| ·Dsn1通过不同的结构域与Rad16-Swi10和Dna2-Cdc24相结合 | 第57-59页 |
| ·DSN复合体的不同亚基可以在DNA损伤位点定位 | 第59-67页 |
| ·DSN复合体中各亚基均能够定位在DSB位点 | 第60-62页 |
| ·Dsn1在DSB位点的募集依赖于Dna2-Cdc24 | 第62-63页 |
| ·Rad16-Swi10在DSB位点的募集依赖于Dsn1 | 第63-65页 |
| ·Rad16-Swi10能够稳定Dsn1在DSB位点的定位 | 第65-67页 |
| ·Dsn1通过与Rad16-Swi10结合来促进单链退火修复的完成 | 第67-76页 |
| ·Dsn1突变体对高剂量IR处理敏感 | 第67-69页 |
| ·Dsn1而不是Saw1的缺失影响单链退火修复 | 第69-72页 |
| ·Dsn1的缺失影响单链退火修复过程中3’非同源单链的切除 | 第72-74页 |
| ·Dsn1与Rad16-Swi10复合体的结合促进单链退火修复中3’非同源单链的切除 | 第74-76页 |
| ·Dsn1在交配型转换和Top1-ccDNA损伤修复中起作用 | 第76-80页 |
| ·Dsn1通过与Rad16-Swi10的相互作用参与交配型转换 | 第76-78页 |
| ·Rad16-Swi10-Dsn1和Tdpl在两个冗余的途径中促进top1-ccDNA的修复 | 第78-80页 |
| ·Dsn1是Rad16-Swi10复合体的激活因子 | 第80-83页 |
| ·Rad16-Swi10具有3’DNA内切酶活性 | 第81-82页 |
| ·Dsn1是Rad16-Swi10的高效酶活所必须的因子 | 第82页 |
| ·重组表达的Dsn1能够激活Rad16-Swi10的3’DNA内切酶活性 | 第82-83页 |
| ·Dsn1抑制Dna2在DNA剪切过程中的作用 | 第83-87页 |
| ·Dsn1的缺失能够抑制exo1△突变体中DNA剪切变慢的表型 | 第83-84页 |
| ·Dsn1的缺失促进末端剪切的效应依赖于Rqh1 | 第84-85页 |
| ·Dsn1对Dna2的抑制作用调控单链退火修复中同源模板的选择 | 第85-87页 |
| ·Dsn1能够抑制RPA复合体对Dna2的激活 | 第87-89页 |
| ·Dna2-Cdc24具有5'DNA内切酶 | 第87-88页 |
| ·Dsn1(227-351)~r能够抑制RPA对Dna25’内切酶活性的激活 | 第88页 |
| ·Dsn1(227-351)~r抑制Dna2-Cdc24复合体与RPA-DNA的结合 | 第88-89页 |
| ·Dsn1的细胞周期调控有助于维持基因组的稳定性 | 第89-95页 |
| ·Dsn1在细胞核内的信号受细胞周期调控 | 第89-92页 |
| ·Dsn1的细胞周期失调会造成细胞对DNA损伤试剂敏感性提高 | 第92页 |
| ·Dsn1的细胞周期失调抑制了Dna2在冈崎片段加工中的作用 | 第92-95页 |
| 第四章 讨论 | 第95-101页 |
| ·Dsn1作为支架蛋白与Rad16-Swi10-Saw1和Dna2-Cdc24相互作用 | 第96-97页 |
| ·Dsn1而不是Saw1或Slx4与Rad16-Swi10一起促进单链退火修复的完成 | 第97-98页 |
| ·Dsn1能够激活Rad16-Swi10的3’DNA内切酶活性 | 第98-99页 |
| ·Dsn1抑制RPA对Dna25’DNA内切酶活性的激活 | 第99-100页 |
| ·Dsn1的细胞周期调控在维持基因组稳定性中的作用 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
